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HIV-1Vpr蛋白调控KSHV裂解性周期复制的初探

作　者: 方欣
导　师: 卢春
学　校: 南京医科大学
专　业: 微生物学
关键词: HIV-1 Vpr 卡波济肉瘤相关疱疹病毒真核表达抑制裂解性周期复制
分类号: R512.91
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 7次
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内容摘要

人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)感染使卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)感染者发生卡波济肉瘤(Kaposi’s sarcoma,KS)的风险大大增加。KSHV是导致KS的病原体,但必须在其它因子的协同作用下才足以发生KS。我们先前的研究表明,HIV-1反式激活蛋白(transactivative transcription protein,Tat)能够激活KSHV裂解性周期复制。本文探索了HIV-1的另一调节蛋白——病毒蛋白R(viral protein regulatory,Vpr)对于KSHV裂解性周期复制的影响。首先,根据GenBank中已登记的HIV-1 Vpr基因序列人工合成该基因,将其插入真核表达载体pCI-neo中成功构建重组Vpr真核表达质粒。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)显示,Vpr基因mRNA在原发性渗出性淋巴瘤【primary effusion lymphoma,PEL,又称体腔淋巴瘤(body cavity-based lymphoma,BCBL)】来源的BCBL-1细胞和NIH3T3细胞中得到了正确转录。免疫荧光(IFA)和Western blot分别显示Vpr蛋白在BCBL-1和NIH3T3细胞中得到了表达。随后,将构建的重组Vpr真核表达质粒转染PEL来源的BCBL-1和BC-3细胞。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,real-time PCR)检测KSHV裂解期基因的mRNA转录水平。结果显示,Vpr转染BCBL-1细胞后可诱导裂解期ORF50(编码KSHV“分子开关”蛋白)、ORF26(编码KSHV次要衣壳蛋白)的mRNA转录水平显著降低。RT-PCR进一步证实,Vpr能够下调PEL细胞系中KSHV裂解期基因的转录。免疫印迹(Western Blot,WB)结果表明,Vpr能够在BCBL-1细胞中下调裂解期基因编码蛋白病毒白细胞介素6(vIL-6)的表达水平。最后,运用虫荧光素酶报告实验(Luciferase Report Assay)对Vpr调控KSHV复制的机制进行了初探。结果显示,Vpr通过抑制ORF50启动子活性来抑制KSHV的裂解性周期复制。以上研究结果提示,在艾滋病相关的卡波济肉瘤(AIDS-associated KS,AIDS-KS)患者体内,Vpr有可能通过抑制KSHV裂解性周期复制来避免KSHV感染细胞后过早地被免疫清除。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-7
前言  7-11
第一部分含HIV-1 Vpr基因重组表达载体的构建及其在真核细胞中的表达  11-20
  引言  11
  材料和方法  11-15
  结果  15-19
  讨论  19-20
第二部分 HIV-1 Vpr 蛋白下调KSHV 裂解性周期复制的初探  20-35
  引言  20
  材料和方法  20-25
  结果  25-33
  讨论  33-35
全文总结  35-36
参考文献  36-42
综述  42-55
  参考文献  49-55
附录1 试剂  55-58
附录2 实验方法  58-62
附录3 攻读硕士学位期间公开发表的学术论文  62-63
致谢  63

HIV-1Vpr蛋白调控KSHV裂解性周期复制的初探

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