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TNF-α拮抗肽缓释微球及其长循环纳米粒的研究

作　者: 江凌宇
导　师: 刘卫
学　校: 华中科技大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: TNF-α拮抗肽(TNF-BP) 长效缓释微球循环纳米粒乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 聚乙烯醇修饰的乳酸-羟基乙酸共聚物(PEG-PLGA)
分类号: R94
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor alpha, TNF-α）在类风湿关节炎、内毒性休克等疾病发生和发展中起重要作用,并导致较高死亡率。前期研究表明,TNF-α拮抗肽（Tumor Necrosis Factor alpha Blocking Peptide ,TNF-BP）生物效应明确,有可能成为抗TNF相关疾病的新型肽类药物。但是,TNF-BP稳定性差、生物半衰期短,难以直接应用于临床。本文分别以乳酸-羟基乙酸共聚物（poly （lactide-co–glycolic acid） , PLGA ）和PEG修饰的PLGA （ polyethyleneglycol-modified poly （ d,l-lactide-co-glycolide）,PEG-PLGA ）为载体材料,制备了载TNF-BP的PLGA长效缓释微球和载TNF-BP的PEG-PLGA长循环纳米粒,为TNF-BP临床应用提供实验依据。主要开展了以下工作:（1）研究了载TNF-BP的PLGA长效缓释微球。以TNF-BP为药物,PLGA为载体,通过二次乳化法制备了TNF-BP长效缓释微球,并对所制得的微球进行了表征评价。为了筛选配方的最佳条件,在单因素考察的基础上,通过正交表L16（45）的设计试验,考察了不同因素水平对微球载药量和包封率的影响。采用光学显微镜、扫描电子显微镜、激光散射仪等技术对PLGA微球进行了表征。对制备的微球采用冷冻干燥技术制备TNF-BP长效缓释微球的冻干粉。通过冷冻干燥工艺的研究,评价了葡萄糖、蔗糖和甘露醇3种多元醇对微球冷冻干燥的影响。对制备的载药微球进行体外释药研究,并对释药行为进行药物释放数学模型拟合。（2）研究了载TNF-BP的PEG-PLGA长循环纳米粒。以TNF-BP为药物,PEG-PLGA为载体,通过溶剂挥发法制备具有长循环效能的TNF-BP长循环纳米粒,并对所制得的纳米粒进行了表征评价。为了筛选配方的最佳条件,考察了不同因素对纳米粒粒径及粒径分布的影响。采用透射电子显微镜、激光散射仪等技术对PEG-PLGA纳米粒进行了表征。对制备的纳米粒进行体外释药研究,并对释药行为进行了药物释放数学模型拟合。对制备的载药纳米粒进行了初步生物学效应的研究,采用流式细胞仪检测了腹腔巨噬细胞对PEG-PLGA纳米粒的吞噬作用,同时采用Western-blot研究了纳米粒对TNF-BP的保护作用。通过以上研究获得了以下结果:（1）通过二次乳化法,采用优化后的工艺制备所得PLGA微球,平均粒径为（10.23±0.03）μm,平均载药量为（13.39±0.29）%,平均药物包封率为（83.54±0.24%）。（2）冷冻干燥对微球的形态和结构都会产生较大影响,因此必须加入冻干保护剂。在葡萄糖、蔗糖和甘露醇3种多元醇冻干保护剂中,3%的甘露醇具有较好的效果。（3）TNF-BP微球具有良好的缓释效果,其体外释药行为符合双相动力学模型方程,回归方程为: Q = ?0 .010+38.856·(1-e^-t/0.496)+27.96·(1-e^-t/50.004)。（4）通过溶剂挥发法采用优化后的工艺制备所得PEG-PLGA纳米粒,平均粒径为（80.8±0.6） nm;粒径分布为（0.073±0.034）;平均Zeta电位为（-17.90±1.00） mV;平均载药量为（1.22±0.15%）;平均药物包封率为（56.10±7.49）%。（5）PEG-PLGA纳米粒体外释药24 h时,累计释放达到71.85%,表现出TNF-BP纳米粒释放效率极高,对于内毒素性休克引发的急性肺损伤具有极为重要的意义。纳米粒的体外释药符合双相动力学模型方程,回归方程为: Q = 0 .008+36.710·(1-e^-t/0.134)+34.705·(1-e^-t/2.580)。（6）制备的PEG修饰的载药纳米粒能有效避免吞噬,达到长循环的目的,此外,长循环纳米粒对载附的药物TNF-BP具有很高的保护作用。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-10
1 绪论  10-28
  1.1 TNF-α的免疫效应  10-15
  1.2 多肽、蛋白质类药物缓释剂型的研究  15-21
  1.3 微球（囊）及长循环纳米粒载体制备材料及制备方法  21-26
  1.4 前期工作基础  26-27
  1.5 本文主要研究内容及意义  27-28
2 TNF-BP缓释微球的制备及表征  28-43
  2.1 引言  28
  2.2 实验部分  28-32
  2.3 结果与讨论  32-42
  2.4 本章小结  42-43
3 TNF-BP缓释微球的冷冻干燥工艺的研究  43-48
  3.1 引言  43
  3.2 实验部分  43-44
  3.3 结果与讨论  44-47
  3.4 本章小结  47-48
4 TNF-BP缓释微球的体外药物释放研究  48-59
  4.1 引言  48
  4.2 实验部分  48-50
  4.3 结果与讨论  50-58
  4.4 本章小结  58-59
5 TNF-BP长循环纳米粒的制备及表征  59-65
  5.1 引言  59
  5.2 实验部分  59-61
  5.3 结果与讨论  61-64
  5.4 本章小结  64-65
6 TNF-BP长循环纳米粒的体外药物释放的研究  65-71
  6.1 引言  65
  6.2 实验部分  65-66
  6.3 结果与讨论  66-70
  6.4 本章小结  70-71
7 TNF-BP长循环纳米粒体外生物学效应的初步研究  71-80
  7.1 引言  71
  7.2 实验部分  71-76
  7.3 结果与讨论  76-79
  7.4 本章小结  79-80
8 总结与展望  80-82
  8.1 全文总结  80-81
  8.2 展望  81-82
致谢  82-84
参考文献  84-92

TNF-α拮抗肽缓释微球及其长循环纳米粒的研究

内容摘要

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