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mRNA差异显示技术研究糙皮侧耳菌丝体及子实体差异表达基因

作　者: 王年久
导　师: 马爱民
学　校: 华中农业大学
专　业: 微生物学
关键词: 糙皮侧耳 菌丝体 子实体 差异显示 苹果酸脱氢酶 肽基脯氨酰异构酶
分类号: Q943.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要


糙皮侧耳（Pleurotus ostreatus），俗称平菇，英文名为oyster mushroom，分类上属于担子菌门（Basidiomycota），层菌纲（Hymenomycetes），伞菌目（Agaricales），侧耳科（Pleurotaceae），侧耳属（Pleurotus）。本研究采用mRNA差异显示技术分离平菇生长发育过程中菌丝体和子实体的差异表达基因。以糙皮侧耳739生长发育的四个阶段菌丝体、原基、菇蕾和成熟子实体的总RNA为模板，用T12M（M分别为G、A、C）3种锚定引物和14种随机引物组合进行DDRT-PCR，经8％变性PAGE凝胶电泳和硝酸银染色，共得到130个差异条带，片段长度为300-1500bp左右，对其中17个差异片段进行克隆测序，测序结果通过GenBank进行BLAST检索分析。结果发现Seq1，Seq2及Seq3与已知基因有较高的同源性，而其他片段与已知基因的同源性较低。其中，Seq1为421bp，为糙皮侧耳的一个未知基因，它在菌丝体中表达不显著，但在原基、菇蕾以及子实体中表达较强烈，在灰盖鬼伞以及香菇中也有类似发现。Seq2为607bp，其在菌丝体中的表达要明显强于原基、菇蕾和成熟子实体，它与苹果酸脱氢酶（MDH）有很高的同源性，MDH是糖酵解途径和三羧酸循环中非常重要的酶，它可能涉及菌丝体发育成原基过程中的某些活跃的生理生化活动，如能量代谢等。Seq3为293bp，与灰盖鬼伞中的一个未知蛋白有很高的同源性，同时，它与棒曲霉中的肽基脯氨酰异构酶（PPIase）有一定的同源性，而PPIase对植物的MYB转录因子有负调控作用。MYB因子能通过光信号对植物进行生理调节及发育形态的调节，因此我们猜测Seq3可能与糙皮侧耳分化发育有一定的作用。其他同源性很低的片段可能为未知的新基因，对这些片段进行进一步的研究，将有助于得到完整的基因和了解糙皮侧耳菌丝体和子实体分化发育的相关机理。

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中图分类: > 生物科学 > 植物学 > 植物细胞遗传学 > 植物基因工程
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