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前列腺癌与良性前列腺增生差异表达基因的克隆和初步鉴定

作　者: 王明清
导　师: 史启铎
学　校: 天津医科大学
专　业: 外科学
关键词: 前列腺癌良性前列腺增生 mRNA差异显示差异表达基因
分类号: R737.25
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

背景与目的：前列腺癌(PCa)在许多西方国家是男性最常见的恶性肿瘤之一。我国前列腺癌的发病率虽然明显低于欧美国家,但近年来,随着人口老龄化、生活条件及检测手段的改善,其发病率有明显上升的趋势。良性前列腺增生(BPH)是老年男性最常见的前列腺良性病变。研究表明前列腺癌的发生是多因素、多基因共同作用的结果,目前对其涉及机制还知之甚少。前列腺癌和良性前列腺增生均存在上皮细胞的过度生长,良性前列腺增生组织基因表达的改变处于相对正常的状态,前列腺癌却因为基因组的不稳定性表现出异常的基因表达。基因表达异常是前列腺癌发生及发展的根本原因。因此,研究前列腺癌和良性前列腺增生基因表达谱的差异可以提供前列腺细胞恶性转化的重要生物学信息。本研究应用荧光mRNA差异显示技术,筛选前列腺癌与良性前列腺增生的差异表达基因,并对其进行克隆及初步鉴定,为发现新的可用于前列腺癌诊断和治疗的分子标记物提供科学依据。方法：一、差异表达基因的筛选和克隆分别提取前列腺癌与良性前列腺增生标本组织的总RNA,然后逆转录成cDNA,PCR扩增后,应用荧光mRNA差异显示技术寻找前列腺癌与良性前列腺增生差异表达的cDNA片段,PCR再扩增差异表达基因片段,Northern印迹杂交,排除假阳性后,经蓝白斑筛选,提取及纯化质粒后,EcoRⅠ及HindⅢ酶切鉴定。二、差异表达基因的序列测定和分析应用末端双脱氧法进行DNA序列测定。在互联网上经BLAST软件进行检索,将测序结果与国际基因序列数据库进行同源性分析。结果：通过荧光mRNA差异显示技术,发现87条差异表达的cDNA条带,切胶分离其中的20条,经过PCR再扩增和克隆、测序后共得14个差异基因片段序列,在前列腺癌组织中高表达的7个cDNA片段中：1个有明显的同源序列,功能已知；4个虽然已经有同源基因序列,但功能未知；2个未找到高度同源序列。在前列腺癌组织中低表达的7个cDNA片段中：3个有明显的同源序列,功能已知；1个虽然已经有同源基因序列,但功能未知；2个未找到高度同源序列；1个无任何同源信息。结论：一、前列腺癌组织基因表达与良性前列腺增生组织相比存在较大的差异,荧光mRNA差异显示技术能有效的筛选出前列腺癌与良性前列腺增生的差异表达基因。二、所筛选出的差异表达基因片段,通过克隆、测序后,进行同源性分析,确定其身份,对进一步了解这些基因的功能及其在前列腺癌中的作用有重要临床意义。三、本研究所发现的新的差异表达基因片段对于构建和完善前列腺癌基因文库具有重要意义。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-10
符号说明  10-12
前言  12-15
第一部分差异表达基因的筛选和分子克隆  15-31
  对象和方法  15-26
  结果  26-31
第二部分差异表达基因的序列测定和分析  31-55
  对象和方法  31-34
  结果  34-55
讨论  55-70
结论  70-71
参考文献  71-78
致谢  78-79

前列腺癌与良性前列腺增生差异表达基因的克隆和初步鉴定

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