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大鼠海马细胞质膜蛋白质组学研究及二维色谱在毒素组学研究中的应用

作　者: 周铁杨
导　师: 王贤纯；梁宋平
学　校: 湖南师范大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 质膜 蛋白质组学 海马 质谱 电泳 二维液相 蛋白质 蜘蛛毒素
分类号: Q51
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要


海马(hippocampus)是大脑颞叶内侧的一个脑结构，是哺乳动物学习和记忆的重要结构区。运用差速离心和连续蔗糖密度梯度离心的方法分离纯化成年大鼠海马组织细胞质膜并用Western blotting对质膜样品进行检测。结果表明，在蔗糖密度梯度离心介质中，膜片主要集中于蔗糖浓度为32％～42％的区段(密度约1.13～1.18)，其次是20％～25％(密度约1.08～1.10)的区段。39％(密度约1.17)层面上质膜浓度和纯度最高。一维SDS-PAGE分离和CapLC-MS／MS分析后，通过数据库搜寻从大鼠海马组织细胞质膜样品中共鉴定出135种蛋白质，其中质膜蛋白和与膜相关的蛋白质共70种(占51.9％)，主要包括Na~+／K~+-ATPase、Glutamate／aspartate transporter、Lipophilin、GLAST 1a等。为研究海马组织细胞的功能和大鼠海马组织细胞质膜蛋白质数据库的建立积累了有价值的资料。虎纹捕鸟蛛是中国最毒的蜘蛛之一，已有的研究表明，其粗毒中含有丰富的低分子量(＜1 kD)蛋白质和多肽活性成分。为了分离和鉴定这些成分，建立了一种新的二维液相色谱分离方法。该方法包括一维的基于蛋白质等电点(pI)分离和二维无孔硅胶反相高效液相色谱分离。通过ProteoVue和DeltaVue软件将反相图谱转换成与二维凝胶电泳图像相似的模拟图。洗脱下来的成分利用Gilson公司的收集器收集，并用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱仪进行分析。在pI 3.5到9.0、分子量1～10 kD的范围内共检测到大约600个蛋白质和多肽条带，通过质谱分析测得130个成分的分子量，并得到26种毒素成分的序列信息，其中包括12种已知的毒素成分。

全文目录


中文摘要  3-5
ABSTRACT  5-9
第一章 大鼠海马细胞质膜的蛋白质组研究  9-63
  第一节 蛋白质组学研究综述  9-29
    1 蛋白质组学概述  10-25
    2 细胞质膜蛋白质组学研究  25-29
  第二节 海马组织细胞质膜的蛋白质组研究  29-60
    1 研究背景和意义  29-33
    2 材料与方法  33-43
    3 结果与分析  43-54
    4 讨论  54-60
  第三节 进一步研究设想  60-63
第二章 虎纹捕鸟蛛毒素的等电聚焦-反相HPLC分离与鉴定  63-84
  第一节 前言  63-70
    1 多维色谱技术发展背景  63-64
    2 二维色谱  64-68
    3 研究目的与意义  68-70
  第二节 虎纹毒素的二维色谱分离和质谱分析  70-83
    1 研究背景  70-71
    2 材料与方法  71-74
    3 结果  74-81
    4 讨论  81-83
  第三节 进一步研究设想  83-84
参考文献  84-100
附录: 缩写表  100-102
论文发表  102-104
致谢  104-106

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中图分类: > 生物科学 > 生物化学 > 蛋白质
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