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登革病毒NS1抗原检测技术的初步研究
作 者: 邹林
导 师: 江振友
学 校: 暨南大学
专 业: 病原生物学
关键词: 登革病毒 NS1蛋白 多克隆抗体 单克隆抗体 交叉反应
分类号: R392.1
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
下 载: 58次
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内容摘要
目的通过制备登革病毒NS1蛋白多克隆抗体及单克隆抗体,并研究其特异性,初步建立登革病毒NS1抗原检测技术。方法1.在已成功构建的登革病毒NS1蛋白毕赤酵母表达系统的基础上,利用该系统进行NS1蛋白的分泌表达;并免疫BALB/C小鼠,制备多克隆抗体。2.将获得的多克隆抗体,用ELISA与免疫荧光法,研究其特异性。3.复苏登革病毒NS1单克隆抗体细胞株,培养扩增,制备腹水抗体,并纯化,用ELISA与免疫荧光法,研究其特异性。4.以登革病毒NS1单克隆抗体为竞争抗体,采用间接竞争ELISA初步建立了登革病毒NS1抗原检测技术。结果1.由转化子Pichia Pastoris-NS 1经过复苏、诱导表达、鉴定和低温真空冻干,成功获得重组表达的NS1蛋白冻干粉。2.将重组表达的蛋白纯化对BALB/C小鼠进行免疫,经鉴定得到特异性针对NS1的高免血清抗体,ELISA测定多克隆抗体的效价为1:13500。经ELISA与免疫荧光两种方法检测,该多克隆抗体与四型登革病毒有交叉反应,。为下一步进行杂交瘤细胞融合,成功筛选出另外一株抗四型登革病毒单克隆抗体奠定基础3.成功复苏已有的登革病毒NS1单克隆抗体细胞株,制备出腹水型单克隆抗体,用ELISA与免疫荧光法证明,该单克隆抗体与四型登革病毒有交叉反应。4.采用间接竞争ELISA法初步建立了登革病毒NSl抗原检测技术。结论由转化子Pichia Pastoris-NS1表达的重组蛋白具有较强的免疫原性,成功制备与四型病毒有交叉反应的鼠抗NSl多克隆抗体。登革病毒NSl单克隆抗体,与四型登革病毒有交叉反应。初步建立了登革病毒NSl抗原检测技术。
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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学免疫学 > 免疫生物学
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