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转录因子SNAI1基因沉默对乳腺癌细胞MCF-7生物学表型的影响

作　者: 于立娜
导　师: 全成实
学　校: 吉林大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 乳腺癌转录因子SNAI1 基因沉默生物学表型
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的:以体外培养的人乳腺癌细胞MCF-7为研究对象,研究转录因子snail(SNAI1)基因沉默对MCF-7细胞生物学表型的影响。方法:针对SNAI1基因序列设计shRNA,并与表达绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)的真核表达载体pGCsilencerTMU6/Neo/GFP连接,转染MCF-7细胞并进行G418筛选,获得质粒相对稳定表达的细胞;通过RT-PCR鉴定SNAI1基因mRNA水平沉默效果;细胞免疫荧光检测SNAI1基因蛋白水平沉默效果及表达定位的改变;倒置显微镜观察细胞形态的改变;细胞计数法检测细胞的增殖能力;细胞划痕法检测细胞的体外迁移能力;Boyden小室法检测细胞的体外侵袭能力;RT-PCR检测上皮标记物claudin-4、claudin-6、claudin-7、E-cadherin和间质标记物MMP-2表达水平的改变。结果:SNAI1基因沉默组相对于对照组细胞形态发生改变;细胞增殖、迁移能力及侵袭能力减弱;细胞的上皮标志物claudin-4、claudin-7、E-cadherin表达升高,间质标志物MMP-2表达降低。结论:SNAI1基因沉默可以抑制MCF-7细胞的恶性表型,并通过其相关靶基因的调控逆转EMT过程。

全文目录

提要  4-6
英文缩写词表  6-7
第1章综述  7-13
第2章材料与方法  13-25
  2.1 细胞株  13
  2.2 主要试剂及耗材  13-14
  2.3 主要仪器设备  14
  2.4 质粒和菌株  14-15
  2.5 主要试剂配制  15-16
  2.6 实验方法  16-25
第3章结果  25-33
  3.1 细胞株的选择  25
  3.2 倒置荧光显微镜观察转染效率  25-26
  3.3 RT-PCR 检测基因沉默效果  26-27
  3.4 细胞免疫荧光检测基因沉默效果和SNA11 蛋白定位的改变  27-28
  3.5 倒置显微镜观察细胞形态  28
  3.6 计数法检测细胞增殖  28-29
  3.7 划痕法检测细胞迁移能力  29-30
  3.8 BOYDEN 小室侵袭实验检测细胞的侵袭能力  30-32
  3.9 RT-PCR 检测细胞的上皮及间质标志物  32-33
第4章讨论  33-38
  4.1 序言  33-34
  4.2 SNAI1基因沉默对乳腺癌细胞MCF-7生物学表型的影响  34-38
第5章结论  38-39
参考文献  39-44
致谢  44-45
中文摘要  45-47
ABSTRACT  47-49

转录因子SNAI1基因沉默对乳腺癌细胞MCF-7生物学表型的影响

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