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大头金蝇幼虫微生物侵染诱导的免疫反应研究

作　者: 孙卓
导　师: 雷朝亮
学　校: 华中农业大学
专　业: 农业昆虫与害虫防治
关键词: 大头金蝇侵染免疫抗菌肽诱导抑菌活性
分类号: S476
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

昆虫免疫(Insect immunity)包括阻止异物侵染的物理性屏障(体壁、消化道等),体腔内的细胞免疫以及具有免疫功能的多种抗菌肽组成的体液免疫。昆虫抗菌肽(Antibacterial peptides,ABPs)作为一种昆虫体液免疫,它具有抗菌谱广、热稳定和不易产生耐药性的优点,可以抗革兰氏阳性菌,也可以抗革兰氏阴性茵,有些甚至对病毒和肿瘤细胞均具有抗性,可以被应用于医药和农业领域。本文以大头金蝇幼虫为研究对象,研究了幼虫对微生物侵染的免疫反应,建立了大头金蝇幼虫抗菌肽诱导方法,确定了诱导最佳条件,对大头金蝇幼虫抗菌肽进行了分离纯化和生物活性检测,取得了以下结果:1.通过对大头金蝇不同龄期幼虫用不同微生物侵染实验,同一龄幼虫不同剂量的侵染,随着剂量的增加,死亡率逐渐升高,化蛹率则逐渐降低。而不同龄幼虫相同剂量的侵染,随着日龄的增加,死亡率逐渐降低,而化蛹率逐渐升高。对不同种类微生物侵染表现出不同的免疫反应。2.对未经诱导的大头金蝇幼虫血淋巴提取物进行抑菌活性测定,发现有较弱的抑菌活性,说明大头金蝇幼虫体内含有抑菌活性物质。此活性物质具有较好的耐热性,属于抗菌肽物质且含量较低。3.以浸泡、带菌针刺、紫外光、超声波5种方法诱导大头金蝇幼虫,研究了不同诱导源对大头金蝇幼虫抗菌肽的抑菌活性的影响,确定了大头金蝇抗菌肽的最佳诱导方式,即带菌针刺效果最好,其抑菌效果均优于其它诱导方法。不同诱导时间处理,发现诱导后24h抗菌肽抑菌效果最好。4.经诱导后的抗菌肽提取液利用Sephadex G50初步纯化后,对其各峰值相对应的分离物进行抑菌活性检测和耐热性及耐冻融性的测定。在280nm下,吸光值为0.6-0.7的峰具有较好的抑菌活性。纯化后的抗菌肽具有较高的抑菌活性,经耐热性和耐冻融性测定发现其亦具有较好的稳定性。

全文目录

摘要  7-8
ABSTRACT  8-10
第一章文献综述  10-23
  1.1 前言  10
  1.2 昆虫的免疫  10-11
  1.3 昆虫抗菌肽的研究进展  11-21
    1.3.1 昆虫抗菌肽的种类及生物学特性  11-14
      1.3.1.1 昆虫抗细菌肽  11-13
      1.3.1.2 昆虫抗真菌肽  13-14
      1.3.1.3 既抗真菌又抗细菌的昆虫抗菌肽  14
    1.3.2 昆虫抗菌肽的作用机理  14-15
    1.3.3 抗菌肽的应用及存在的问题  15-20
      1.3.3.1 抗菌肽的应用  16-17
      1.3.3.2 抗菌肽转基因的研究  17-19
      1.3.3.3 存在的问题  19-20
    1.3.4 蝇类昆虫抗菌肽  20-21
  1.4 本文研究的任务和内容  21-23
第二章大头金蝇幼虫对不同微生物侵染的免疫研究  23-34
  1 材料与方法  23-25
    1.1 供试材料  23-24
      1.1.1 供试昆虫  23
      1.1.2 供试微生物  23
      1.1.3 实验仪器  23-24
      1.1.4 试剂  24
    1.2 微生物的培养  24-25
      1.2.1 大肠杆菌  24
      1.2.2 金黄色葡萄球菌  24
      1.2.3 白僵菌  24
      1.2.4 解脲支原体  24
      1.2.5 苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒  24-25
    1.3 不同微生物侵染对不同龄期大头金蝇幼虫的影响  25
  2 结果与分析  25-32
    2.1 不同微生物侵染对不同龄期大头金蝇幼虫死亡率的影响  25-28
    2.2 不同微生物侵染对不同龄期大头金蝇幼虫化蛹率的影响  28-32
  3 本章小结与讨论  32-34
第三章大头金蝇幼虫抗菌肽粗提及抑菌活性检测  34-39
  1 材料与方法  34-36
    1.1 供试材料  34-35
      1.1.1 供试昆虫  34
      1.1.2 供试菌种  34
      1.1.3 主要仪器  34
      1.1.4 试剂  34-35
    1.2 样品的预处理  35
    1.3 不同水浴温度下提取物的抑菌活性  35
    1.4 不同沸水浴时间下提取物的抑菌活性  35
    1.5 抑菌活性测定  35-36
  2 结果与分析  36-38
    2.1 不同水浴温度下提取物的抑菌活性  36-37
    2.2 不同沸水浴时间下提取物的抑菌活性  37-38
  3 本章小结与讨论  38-39
第四章不同诱导条件对大头金蝇幼虫抗菌肽抑菌活性的研究  39-45
  1 材料与方法  39-41
    1.1 供试材料  39-40
      1.1.1 供试幼虫  39
      1.1.2 供试微生物  39
      1.1.3 实验仪器  39
      1.1.4 试剂  39-40
    1.2 不同诱导源对大头金蝇幼虫抗菌肽抑菌活性的影响  40-41
      1.2.1 浸泡法诱导  40
      1.2.2 带菌针刺法诱导  40
      1.2.3 紫外光诱导  40
      1.2.4 超声波诱导  40-41
    1.3 不同诱导时间下大头金蝇幼虫抗菌肽抑菌活性  41
    1.4 抑菌活性检测  41
  2 结果与分析  41-43
    2.1 不同诱导源对大头金蝇幼虫抗菌肽抑菌活性的影响  41-43
    2.2 不同诱导时间下大头金蝇幼虫抗菌肽抑菌活性  43
  3 本章小结与讨论  43-45
第五章大头金蝇幼虫抗菌肽分离纯化及抑菌活性测定  45-51
  1 材料与方法  45-46
    1.1 供试材料  45-46
      1.1.1 抗菌肽提取液  45
      1.1.2 供试菌种  45
      1.1.3 实验仪器  45-46
      1.1.4 试剂  46
    1.2 抗菌肽的分离纯化  46
    1.3 大头金蝇抗菌肽的耐热、耐冻融性测定  46
  2 结果与分析  46-50
    2.1 抗菌肽的分离纯化  46-48
    2.2 大头金蝇抗菌肽的耐热、耐冻融性测定  48-50
  3 本章小结与讨论  50-51
第六章总结  51-52
参考文献  52-59
致谢  59-60

大头金蝇幼虫微生物侵染诱导的免疫反应研究

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