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川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤模型中FADD表达及Caspase-8活性的影响

作　者: 王圣轩
导　师: 胡建中；吕红斌
学　校: 中南大学
专　业: 外科学
关键词: 脊髓损伤(SCI) 川芎嗪(TMP) 半胱天冬氨酸蛋白酶8(Caspase-8) Fas相关死亡域蛋白(FADD)
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 77次
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内容摘要


目的:利用改良Allens打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型,观察损伤段脊髓组织中Fas相关死亡域蛋白(FADD)的表达及半胱天冬氨酸蛋白酶8(Caspase-8)的活性以及川芎嗪干预对损伤段脊髓组织中Fas相关死亡域蛋白(FADD)表达及半胱天冬氨酸蛋白酶8(Caspase-8)活性的影响。进一步探讨川芎嗪对急性脊髓损伤的保护作用及可能机制。材料和方法:正常成年SD大鼠99只,随机分成三组:(1)假手术组(n=9);(2)对照组(n=45);(3)实验组(n=45)实验组和对照组大鼠按术后动物存活的时间再各分为1小时组,3小时组,6小时组,12小时组、1天组、3天组、7天组、14天组和21天组,共9个亚组,每亚组5只大鼠。实验组大鼠伤后30分钟后开始予川芎嗪注射液经腹腔内注射200mg/kg,每天给药一次,存活时间少于5天者用药至死,多于5天者用药5天。对照组大鼠给予等量的生理盐水经腹腔内注射,给药次数和实验组相同。在相应时间点分别处死大鼠获取脊髓标本。检测指标包括:1.脊髓功能行为学评分。1天及超过1天处死的大鼠在处死前作改良Rivlin斜板实验、BBB评分和CBS评分,以此评测脊髓运动神经功能。2.FADD免疫组化染色。自每个脊髓损伤段中部横行切片,做FADD的免疫组化染色,观察FADD的表达情况并计数,并比较各组不同时间点FADD的表达。3.Caspase-8活性检测。自每个脊髓标本损伤段取10mg脊髓组织,匀浆取上清液,测定其中Caspase-8的酶活力单位浓度,并比较各组脊髓不同时间点Caspase-8的酶活力单位浓度。利用SPSS13.0统计分析软件进行统计学分析。结果:改良Rivlin斜板实验,术后斜板临界角度均值随时间点延长逐渐升高,实验组分别在术后7天、14天和21天时,较对照组斜板临界角度高。两组间斜板临界角度差异在术后7天时有统计学意义(P＜0.05),在术后14天和21天时具有显著统计学意义(P＜0.01)。BBB评分,术后BBB评分均值随时间点延长逐渐升高,实验组在术后7天、14天和21天时,较对照组BBB评分值高。两组间BBB评分值差异在术后7天时有统计学意义(P＜0.05),在术后14天和21天时具有显著统计学意义(P＜0.01)。CBS评分,术后CBS评分均值随时间点延长逐渐降低,实验组在术后7天、14天和21天时,较对照组评分值低。两组间CBS评分值差异在术后7天、14天和21天时具有显著统计学意义(P＜0.01)。术后两组大鼠脊髓损伤段脊髓前角神经元细胞和神经胶质细胞中的FADD表达自术后6小时开始升高,实验组术后1天达到峰值;对照组术后3天达峰值,随后降低,在术后14天时达到第二峰值,后再降低。术后3天,7天和14天时,实验组的FADD表达计数均值都低于对照组,其差异具有统计学意义(P＜0.05)。术后两组大鼠脊髓损伤段脊髓的Caspase-8酶活力单位浓度自术后3小时开始升高,实验组术后1天达到第一峰值,对照组术后3天达到第一峰值,两组在术后14天时达到第二峰值。术后3天,7天和14天时,实验组的Caspase-8酶活力单位浓度均值都低于对照组,其差异具有显著的统计学意义(P＜0.01)。结论:①川芎嗪能够促进大鼠脊髓继发性损伤过程中脊髓功能的恢复;②川芎嗪能够抑制大鼠急性脊髓损伤模型中FADD的表达及Caspase-8的活性。

全文目录


中文摘要  4-6
英文摘要  6-9
第一章 前言  9-12
第二章 材料与方法  12-24
  2.1 主要设备和试剂  12-13
  2.2 大鼠分组和饲养  13-14
  2.3 大鼠急性脊髓损伤模型的制作  14-15
  2.4 大鼠的给药  15
  2.5 脊髓运动功能的行为学评分  15-18
  2.6 大鼠脊髓标本的获取  18-19
  2.7 大鼠脊髓组织蜡块切片  19
  2.8 HE染色观察脊髓组织病理学改变  19-20
  2.9 ABC染色法检测FADD的表达  20-21
  2.10 大鼠脊髓组织匀浆取上清液  21-22
  2.11 检测样本中Caspase-8的活性  22-23
  2.12 统计学分析  23-24
第三章 结果  24-36
  3.1 行为学评分  24-29
  3.2 HE染色病理改变  29-31
  3.3 大鼠脊髓损伤段脊髓前角FADD阳性细胞表达检测结果  31-33
  3.4 大鼠脊髓损伤段脊髓前角Caspase-8活性检测结果  33-36
第四章 讨论  36-42
  4.1 实验动物的选择  37
  4.2 脊髓损伤模型的选择  37
  4.3 实验动物的给药  37-38
  4.4 大鼠建模及饲养过程中常见并发症及死亡原因  38
  4.5 脊髓损伤功能评价及方法选择  38-39
  4.6 Fas相关死亡域蛋白(FADD)、Caspase-8和脊髓损伤  39-40
  4.7 川芎嗪对脊髓损伤的保护作用  40-41
  4.8 展望  41-42
第五章 结论  42-43
参考文献  43-47
综述  47-57
  参考文献  54-57
致谢  57

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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