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P38MAPK与caspase-3在大鼠胃缺血再灌注中的表达及其相关性研究

作　者: 刘峰
导　师: 杨继武
学　校: 大理学院
专　业: 外科学
关键词: 胃缺血再灌注损伤(gastric ischemia-reperfusion injury, GI-RI) p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK) 半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)
分类号: R656.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

实验目的胃肠缺血再灌注损伤是胃肠手术、全身炎症反应综合症和机体应激后导致胃肠溃疡、出血或功能障碍等的一种基本病理生理变化。本课题采用免疫组织化学等检测方法,观察大鼠胃缺血30min后不同再灌注时间段胃黏膜表达p38MAPK (mitogen-activated protein kinase, MAPK)和半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的变化趋势；结合相应时间段胃黏膜损伤指数及其组织病理学变化,探索胃缺血再灌注损伤(gastric ischemia-reperfusion injury, GI-RI)中p38MAPK和caspase-3表达的规律；最后用医学统计学方法分析p38MAPK. caspase-3的表达与胃粘膜损伤程度的关系,探讨两者在GI-RI中表达的相关关系。实验材料与方法健康成年SD大鼠30只,雌雄各半,体重220±10g,随机分为假手术组和缺血再灌注组。10%水合氯醛0.3ml/100g腹腔注射,麻醉成功后取腹部正中切口,分离并阻断胃主要动脉(胃左动脉、胃右动脉、胃网膜左动脉、胃网膜右动脉以及胃后、胃短动脉)30min后去除动脉夹再灌注0.5h、1h、3h、6h和24h,将大鼠断颈椎处死,开腹取胃。首先以两把血管钳分别夹闭食管和十二指肠胃端,而后胃内注射10%中性甲醛溶液1ml,取胃：沿胃大弯纵行切开,以冰盐水清洗后置入10%中性甲醛溶液测量胃黏膜出血情况,标记后置入10%中性甲醛溶液固定约12h；取材,主要取腺胃组织约0.5×1cm2,石蜡包埋,制作5μm连续切片(每个样本做出3张组织切片分别用于p38MAPK、caspase-3检测和HE染色)。应用免疫组织化学方法检测30例大鼠胃的p38MAPK和caspase-3的表达情况,以假手术组作对照,显微镜400×下,每个切片在胃黏膜区域随机选取5个视野。应用IPP6.0图像分析软件检测积分光密度(IOD)和面积(Area)值,计算求得各组平均光密度值(mean density),测得数据以均数±标准差表示。应用SPSS13.0软件对相关数据进行分析,取p=0.05为检验水准。结果假手术组胃黏膜表达p38MAPK和caspase-3水平较低,GI-R后胃黏膜表达p38MAPK和caspase-3水平迅速上升；再灌注0.5h时caspase-3表达呈高峰,随后开始下降,至再灌注后3h降至最低,而后又缓慢升高,至再灌注24h达第二个高峰；p38MAPK在再灌注1h时达到峰值,随后下降,但仍维持在较高水平至再灌注：24h。GI-R后胃黏膜损伤指数显著上升,至再灌注1h达峰值；随着再灌注时间延长,胃黏膜在多种因素作用下进行修复或适应,损伤指数开始下降,至再灌注3h到低谷；此后损伤指数又开始缓慢上升,胃黏膜损伤又有所加重但低于前者,再灌注后6h至24h没有明显变化。结论GI-RI是由多因素参与的损伤与修复过程,其中caspase-3表达是促进GI-RI进展的重要因素之一；GI-RI在GI-R 1h内进展最快、表现最严重,该时间段可能是防治GI-RI的关键；p38MAPK调控的炎性反应、细胞凋亡等,参与了GI-RI的形成、发展和转归；在GI-RI中,p38MAPK和caspase-3的表达在统计学上不表现为相关性。

P38MAPK与caspase-3在大鼠胃缺血再灌注中的表达及其相关性研究

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