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天然冰片、合成冰片及薄荷脑对P-糖蛋白的影响及其机制研究

作　者: 周金雯
导　师: 杨星昊
学　校: 南京师范大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 天然冰片 合成冰片 薄荷脑 P-糖蛋白 Caco-2
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


一、目的研究天然冰片、合成冰片、薄荷脑对P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)功能及表达的影响,并评价天然冰片与合成冰片的区别。为这三种活性成份的配伍应用及其新药研发提供依据。二、方法1.细胞毒性实验采用MTT法进行细胞毒性实验,使实验过程中采用的细胞活性>98%。2. Rhodamine 123 (Rh123)积累与外排实验用酶标仪测定P-gp底物Rh123在Caco-2细胞中积累的变化,再进一步测定其外排的变化,以确定天然冰片、合成冰片、薄荷脑对P-gp的功能的影响。3.P-gp与MDR1 mRNA的表达测定采用Western blot与RT-qPCR方法分析天然冰片、合成冰片、薄荷脑对Caco-2细胞中P-gp与MDR1mRNA表达水平的影响。三、结果1.细胞毒性实验确定了本实验条件下各自的实验浓度范围(与Caco-2细胞孵育48h后,细胞活性>98%)：天然冰片(5-65μM)、合成冰片(5-35μM)及薄荷脑(2-5μM)。2.Rh123积累与外排实验药物与Caco-2细胞孵育48h后,细胞中Rh123的积累量与冰片的浓度呈正相关。天然冰片(5-35μM)或合成冰片(10-35μM)能显著增加Rh123的积累量。药物与Caco-2细胞孵育1h后,低浓度(5、10μM)的天然冰片与合成冰片对Rh123的外排没有影响。高浓度(20、35μM)的天然冰片或合成冰片使Rh123的外排量显著增加。薄荷脑(2、5、10、20μM)对细胞中Rh123的量没有显著性影响。3.P-gp与MDR1 mRNA的表达测定天然冰片或合成冰片(35μM)与Caco-2细胞孵育48 h后,Caco-2细胞中P-gp与MDR1 mRNA的表达量显著下降。天然冰片与合成冰片的作用未见显著性差异。薄荷脑(5μM)对细胞中P-gp与MDR1 mRNA的表达量没有显著性影响。四、结论1.天然冰片或合成冰片可以通过抑制MDR1 mRNA的表达水平而下降P-gp的水平,从而影响P-gp转运功能。2.实验中薄荷脑对P-gp的表达与功能均无明显作用,提示其不是P-gp抑制剂。3.天然冰片或合成冰片与P-gp底物合用可能会产生药物相互作用,临床效果有待进一步验证。4.天然冰片或合成冰片可能成为多药耐药抑制剂,辅助肿瘤化疗。

全文目录


摘要  3-5Abstract  5-10第1章 绪论  10-16  1.1 P-gp简介  10-12  1.2 Caco-2细胞模型简介  12-13  1.3 冰片、薄荷脑的研究现状  13-16    1.3.1 冰片的研究现状  13-14    1.3.2 薄荷脑的研究现状  14-16第2章 设计思想与技术路线  16-18  2.1 设计思想  16  2.2 技术路线  16-18    2.2.1 Caco-2细胞模型的建立及检测  16    2.2.2 药物的确定  16-17    2.2.3 工作液浓度的确定  17    2.2.4 Rh123积累与外排研究  17    2.2.5 P-gp与MDR1 mRNA表达研究  17-18第3章 Caco-2细胞培养及模型建立  18-24  3.1 实验仪器与材料  18-19    3.1.1 仪器  18    3.1.2 细胞株  18    3.1.3 药品与试剂  18-19  3.2 实验方法  19-22    3.2.1 相关试剂配制  19-20    3.2.2 细胞培养  20-21    3.2.3 Caco-2细胞单层模型的建立  21    3.2.4 细胞模型评价  21-22  3.3 结果  22-23  3.4 讨论  23-24第4章 细胞毒性实验  24-30  4.1 实验仪器与材料  24-25    4.1.1 仪器  24-25    4.1.2 药品与试剂  25  4.2 实验方法  25-26    4.2.1 相关试剂配制  25    4.2.2 MTT实验  25-26    4.2.3 色谱条件  26    4.2.4 样品测定  26  4.3 数据处理  26  4.4 结果  26-29    4.4.1 MTT实验结果  26-28    4.4.2 气相实验结果  28-29  4.5 讨论  29-30第5章 天然冰片、合成冰片、薄荷脑对P-gp功能的影响  30-39  5.1 实验仪器与材料  30-31    5.1.1 仪器  30-31    5.1.2 药品与试剂  31  5.2 实验方法  31-33    5.2.1 相关试剂配制  31    5.2.2 BCA法蛋白含量测定  31-32    5.2.3 荧光淬灭或增强作用考察  32    5.2.4 天然冰片、合成冰片、薄荷脑对Rh123细胞内积累的影响  32    5.2.5 天然冰片、合成冰片、薄荷脑对Rh123细胞内外排的影响  32-33  5.3 数据处理  33  5.4 结果  33-36    5.4.1 荧光淬灭或增强作用考察  33    5.4.2 蛋白标准曲线的建立  33-34    5.4.3 天然冰片、合成冰片、薄荷脑对Rh123细胞内积累的影响  34-35    5.4.4 天然冰片、合成冰片、薄荷脑对Rh123细胞内外排的影响  35-36  5.5 讨论  36-39第6章 天然冰片、合成冰片、薄荷脑对P-gp及MDR1 mRNA表达的调控  39-57  6.1 实验仪器与材料  39-40    6.1.1 仪器  39-40    6.1.2 药品与试剂  40  6.2 实验过程  40-49    6.2.1 相关试剂配制  40-43    6.2.2 细胞培养及加药  43    6.2.3 天然冰片、合成冰片、薄荷脑对P-gp表达量的影响  43-45    6.2.4 天然冰片、合成冰片、薄荷脑对MDR1 mRNA表达量的影响  45-49  6.3 数据处理  49  6.4 结果  49-54    6.4.1 天然冰片、合成冰片、薄荷脑对P-gp表达量的影响  49-50    6.4.2 天然冰片、合成冰片、薄荷脑对MDR1 mRNA表达的影响  50-54  6.5 讨论  54-57第7章 总结  57-58参考文献  58-63致谢  63

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
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