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牛脑海马NGF的分离纯化、鉴定及微量元素的测定

作　者: 顾鹏毅
导　师: 孙晋民
学　校: 中国医科大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 牛脑NGF 分离纯化 PC12细胞微量元素
分类号: Q42
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

前言神经生长因子(never growth factor,NGF)是神经营养因子中最早被发现,目前研究较为透彻的,具有神经元营养和促进突起生长双重生物学功能的一种神经细胞生长调节因子,其临床应用前景广阔。它对中枢及周围神经元的发育、分化、生长、再生和功能特性的表达均具有重要的调控作用。NGF具有多种营养性生物学效应:对胚胎发育期神经元的作用;促进生后发育神经元的生长;维持成熟神经元的存活;促进神经损伤的修复与再生;对神经变性性疾病的作用;对肿瘤的潜在性治疗作用;在炎性疾病中的作用;在糖尿病周围神经病变中的治疗作用。目前,NGF的主要来源是小鼠的颌下腺、蛇毒、豚鼠前列腺、牛精液等,临床较多的采用小鼠颌下腺、蛇毒来源以及基因工程产品人重组NGF(rhNGF),其对人的神经组织有明显的作用,国内外文献已有很多报道。人体的微量元素有70种,根据其作用分为人体必需微量元素和非必需微量元素及人体有害微量元素二类。所谓必需微量元素,就是正常人体生命过程中不可缺少的微量元素,它参与人体的重要的生命活动过程,对人体的各种生理活动起影响、调节作用。锌在脑中的分布是不均衡的,其中尤以海马结构最高,约占全脑的1/6,它主要位于海马苔状纤维的胞浆中,这些纤维起自海马,止于下丘脑。本研究对牛脑神经生长因子进行分离纯化,以期为下一步应用性研究做好基础。材料与方法从牛脑中分离出海马结构,利用生物大分子分离纯化技术分离纯化出NGF;利用电泳、蛋白印记杂交鉴定提取物为NGF;采用PC12细胞法测定其生物学活性;对其微量元素Zn、Fe、Cu进行测量。结果牛脑海马粗提物经透析过夜,再经CM柱离子交换层析,得到2个洗脱峰:CM1峰、CM2峰,其中CM2峰为NGF的主要含量峰。电泳及WB结果表明:NGF的主要含量带大约为55KD,次含量带约为70KD,主、次含量带中亦含有β亚基,但结合了不同的α、γ亚基,WB显示的各条带中均含有活性基团β亚基。CM1分离组分和粗提物作用下的PC12细胞轴突生长不明显,标准品NGF、CM2分离组分作用下的PC12细胞轴突生长两者间存在差异(P<0.01),CM2分离组分作用效果低于标准品NGF,但也满足活性判定标准,可以认为CM2分离组分有生物学活性。牛脑海马结构的微量元素中Zn与Cu含量无差别,Fe与Zn、Cu有差异(P<0.01);NGF中Fe与Cu含量无差异,Zn远高于Fe、Cu含量(P<0.01)。结论1.分离纯化得到的牛脑海马NGF的分子量主要为55KD、70KD的两种成分,具有生物学活性。2.牛脑海马结构中锌元素的含量与铜元素相当,低于铁元素水平;牛脑海马NGF中锌元素的含量明显高于铁、铜元素含量。

全文目录

一、摘要  4-9
  中文论著摘要  4-6
  英文论著摘要  6-9
二、英文缩略语  9-10
三、论文  10-33
  前言  10-13
  材料与方法  13-24
  实验结果  24-31
  讨论  31-32
  结论  32-33
四、本研究创新性的自我评价  33-34
五、参考文献  34-36
六、附录  36-52
  综述  36-50
  在学期间科研成绩  50-51
  致谢  51-52
  个人简介  52

牛脑海马NGF的分离纯化、鉴定及微量元素的测定

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