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猪弓形虫代谢分泌抗原免疫应答的研究

作　者: 蔡志杰
导　师: 张德林；赵晋军
学　校: 甘肃农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 猪弓形虫代谢分泌抗原抗弓形虫抗体细胞因子 T细胞亚群
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

弓形虫(Toxoplasma gondii)为专性细胞内寄生原虫,呈全球性分布,引起的弓形虫病是一种危害十分严重的人兽共患寄生虫病,对人类健康、优生优育和畜牧业发展造成严重威胁。因此,弓形虫病疫苗的研制已成为该病防治的当务之急。为阐明弓形虫代谢分泌抗原(E/SA)对猪的免疫效应机制,将猪随机分为6组,每组5只,分别为E/SA组、E/SA+CpG(未乳化)组、E/SA+CpG组、E/SA +IL-2组、E/SA+IL-2+CpG组及空白对照组。共免疫2次,间隔2周,在第2次免疫后2周用弓形虫GJS株速殖子攻击感染。分别于免疫前、免疫后2周、免疫后4周、攻毒后1周及攻毒后2周采集仔猪外周血,用IHA检测试剂检测血清中抗弓形虫抗体水平;用ELISA方法检测血清中IL-2、IL-4、IFN-γ及TNF-α的含量;用流式细胞仪检测外周血中CD4+及CD8+ T淋巴细胞亚群的动态变化规律。结果表明,免疫后各免疫组抗弓形虫IHA抗体水平大部分升至1:1024;血清中IL-2、IL-4、IFN-γ的含量均不同程度的升高,其中E/SA组IL-2、IL-4、IFN-γ含量显著提高,其含量分别由免疫前的105.05、105.33、67.50 pg/mL升高到免疫后的194.03、342.50、296.50 pg/mL,与对照组差异显著(P<0.05);TNF-α含量变化不明显。免疫组外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞在免疫后升高,其中E/SA组升高最为明显,CD4+、CD8+T细胞的水平分别由免疫前的21.51%,23.9%升高到免疫后的35.72%,32.8%。用弓形虫GJS强毒攻击后,免疫组和对照组猪体温差异明显,免疫组猪呈一过性低烧,食欲正常;对照组仔猪呈稽留高温,食欲不振,并且伴有拉稀症状。研究表明,用E/SA免疫猪后可刺激机体抗弓形虫抗体产生,促进IL-2、IL-4、IFN-γ的分泌,诱导机体CD4+、CD8+T淋巴细胞大量增殖,产生较强的体液免疫和细胞免疫应答,激发宿主抗弓形虫感染的免疫应答反应。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-6
缩写词对照  6-10
引言  10-12
文献综述弓形虫代谢分泌抗原研究进展  12-22
  1. 代谢分泌抗原（E/SA）组分在免疫中的研究  12-17
    1.1 微线体蛋白的研究  13
    1.2 棒状蛋白的研究  13-15
    1.3 致密颗粒蛋白的研究  15-17
  2. 弓形虫代谢分泌抗原的制备  17
  3. E /SA 在弓形虫病诊断中的应用  17-18
  4. E /SA 的免疫性保护应答  18-21
    4.1 E/SA 诱导的细胞免疫应答  19-20
    4.2 E/SA 诱导的体液免疫应答  20-21
  5. 结语  21-22
实验部分  22-43
  第一章猪免疫弓形虫代谢分泌抗原后的免疫应答研究  22-42
    1. 实验材料  23
      1.1 虫株及细胞  23
      1.2 实验动物  23
      1.3 主要实验试剂  23
    2. 方法  23-28
      2.1 弓形虫速殖子的分离净化  23
      2.2 Vero 细胞的培养  23-24
        2.2.1 细胞传代培养液的配制  23-24
        2.2.2 细胞复苏  24
        2.2.3 细胞传代  24
      2.3 弓形虫E/SA 的制备  24-25
      2.4 弓形虫 E/SA 疫苗的制备  25
      2.5 疫苗的安全性检测  25
      2.6 实验动物分组及免疫  25
      2.7 采血及临床观察  25
      2.8 弓形虫抗体检测  25-27
        2.8.1 原理  26
        2.8.2 操作方法  26
        2.8.3 结果判定  26-27
      2.9 免疫后猪IL-2、IL-4、IFN-γ及TNF-α的检测  27
        2.9.1 原理  27
        2.9.2 操作方法  27
      2.10 免疫后猪外周血 T 淋巴细胞亚群的检测  27-28
        2.10.1 操作步骤  27-28
        2.10.2 注意事项  28
      2.11 数据分析  28
    3. 结果  28-37
      3.1 疫苗的安全性  28
      3.2 猪临床症状变化  28-29
      3.3 免疫后猪血清中的抗体水平的测定  29-30
      3.4 免疫后猪细胞因子含量的变化  30-32
        3.4.1 免疫后对IL-2 含量的影响  30
        3.4.2 免疫后对IL-4 含量的影响  30-31
        3.4.3 免疫后对 IFN-γ含量的影响  31
        3.4.4 免疫后对TNF-α含量的影响  31-32
      3.5 各组免疫前后 IL-2、IL-4、IFN-γ和 TNF-α含量的变化规律分析  32-35
        3.5.1 E/SA 组中IL-2、IL-4、IFN-γ和TNF-α含量动态变化  32-33
        3.5.2 E/SA+CpG（未乳化）组中IL-2、IL-4、IFN-γ和TNF-α含量动态变化  33
        3.5.3 E/SA+CpG 组中 IL-2、IL-4、IFN-γ和 TNF-α含量动态变化  33-34
        3.5.4 E/SA+IL-2 组中 IL-2、IL-4、IFN-γ和 TNF-α含量动态变化  34
        3.5.5 E/SA+IL-2+CpG 组中IL-2、IL-4、IFN-γ和 TNF-α含量动态变化  34-35
      3.6 猪外周血T 淋巴细胞亚群的变化  35-37
        3.6.1 对猪外周血CD3+淋巴细胞的影响  35-36
        3.6.2 对猪外周血CD4+淋巴细胞的影响  36
        3.6.3 对猪外周血CD8+淋巴细胞的影响  36-37
        3.6.4 对猪外周血 CD4+/CD8+淋巴细胞的影响  37
    4. 讨论  37-42
  第二章研究结论  42-43
参考文献  43-51
致谢  51-52
作者简介  52-53
导师简介  53-54

猪弓形虫代谢分泌抗原免疫应答的研究

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