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香菇纤维素酶基因cel6B的克隆及其在大肠杆菌中的表达

作　者: 杨婷
导　师: 王景雪
学　校: 山西大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 香菇 纤维素酶 cel6B基因 刚果红 RT-PCR
分类号: S646.12
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 4次
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内容摘要


纤维素是植物通过光合作用产生的生物质能,理论上,每亿吨农作物秸秆可生产乙醇1166.7万t,此外,纤维素类生物质替代石油原料制取汽油和柴油,是可再生能源开发利用的重要方向。据估计,全球每年经光合作用产生的生物质约1700亿t,其能量相当于全球能量年消耗总量的10倍,而作为能源的利用量还不到总量的1%,究其原因,天然纤维素水不溶性的高度结晶构造和其外围常包裹着的木质素是阻碍其降解的主要原因。水解法是利用生物产生的多种纤维素酶将纤维素分解成为可利用的葡萄糖,它不仅可以实现资源的再利用,还可以缓解环境污染,并实现资源的可持续利用。有关纤维素降解机理的研究开展了很多,但是天然纤维素在被纤维素酶分解转化成葡萄糖的过程中,许多细节至今仍不清楚。本实验用液体PDA培养基中培养的香菇菌丝体作为实验材料,提取香菇总RNA,通过RT-PCR方法,克隆得到纤维素酶基因ce16B,并成功构建了原核表达载体pET28a-ce16B。将pET28a-ce16B载体转入大肠杆菌BL21(DE3)中,构建成为工程菌,用IPTG诱导蛋白质的表达。SDS-PAGE电泳结果表明：在IPTG诱导下,ce16B基因编码出46.4 kDa的蛋白质CEL6B。将工程菌接种在以CMC-Na(羧甲基纤维素钠)为唯一碳源的刚果红液体培养基中培养7 d后,刚果红颜色变浅,初步证明纤维素酶CEL6B具有分解纤维素的能力。

全文目录


中文摘要  8-9ABSTRACT  9-111 引言  11-17  1.1 文献综述  11-16    1.1.1 纤维素的基本概念  11-12    1.1.2 纤维素酶的结构及研究概况  12-14    1.1.3 真菌纤维素酶基因工程研究进展  14-15    1.1.4 蛋白质表达载体的选择  15-16  1.2 研究目的和意义  16-172 材料和方法  17-23  2.1 实验材料  17-18    2.1.1 菌株与质粒  17    2.1.2 主要试剂及试剂盒  17    2.1.3 主要溶液的配制  17-18    2.1.4 主要仪器设备  18  2.2 实验方法  18-23    2.2.1 香菇材料的培养  18-19    2.2.2 提取香菇总RNA  19    2.2.3 RT-PCR  19    2.2.4 PCR扩增并割胶回收  19-20    2.2.5 回收产物加"A"并纯化  20-21    2.2.6 构建ce16B-T载体  21    2.2.7 转化感受态细胞并用X-gal(蓝白斑)筛选  21-22    2.2.8 质粒测序及序列分析  22    2.2.9 原核表达载体的构建  22-23    2.2.10 重组原核表达载体的诱导表达  23    2.2.11 纤维素酶CEL6B分解羧甲基纤维素钠(CMC-Na)  233 结果与分析  23-29  3.1 香菇总RNA的提取及CEL6B基因的克隆  23-25  3.2 测序结果及序列比对分析  25-27  3.3 原核表达载体PET28A-CEL6B的构建  27-28  3.4 CEL6B蛋白质的诱导表达  28  3.5 纤维素酶CEL6B分解CMC-NA  28-294 讨论  29-31参考文献  31-36攻读学位期间取得的研究成果  36-37致谢  37-38个人简况及联系方式  38-40

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中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 蔬菜园艺 > 菌类（食用菌） > 褶伞菌 > 香菇（香蕈）
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