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Ⅰ群禽腺病毒灭活油乳剂苗的研究

作　者: 韦悠
导　师: 谢芝勋
学　校: 广西大学
专　业: 预防兽医学
关键词: Ⅰ群禽腺病毒血清1型间接ELISA 灭活油乳剂苗
分类号: S855.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

本研究使用了过滤法及蔗糖梯度密度离心两种方法制备了Ⅰ群禽腺病毒血清1型(FAV-1)全病毒作为包被抗原,分别建立了检测Ⅰ群禽腺病毒抗体的两种间接酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)诊断方法。抗原最佳包被浓度分别为108.96copies/mL及109.16copies/mL,最佳血清稀释度均为1：100。两种ELISA方法检测FAV-1阳性对照血清,当血清稀释至6400倍及12800倍时,结果仍为阳性；检测禽流感病毒、新城疫病毒及禽乎肠孤病毒阳性血清结果均为阴性,重复试验变异系数均小于5%。应用两种ELISA方法同时检测了FAV-1灭活疫苗抗体水平及临床检查,比较结果表明：过滤法ELISA在相同抗体水平上OD值平均高出26.46%,在低水平抗体的检测上具有更高敏感性。本研究建立的诊断方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,为Ⅰ群禽腺病毒免疫鸡的抗体监测和Ⅰ群禽腺病毒流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。为研制禽Ⅰ群腺病毒血清1型(FAV-1)油乳剂灭活疫苗,本实验室以FAV-1为种毒,进行了病毒增殖条件的优化,确定该病毒最佳接种剂量为105.4TCID50/mL,最佳收胚时间为72-96h。获得病毒ELD50为109.31ELD50/mLEID50为108.55EID5o/mL、TCID50为108.14TCID50/mL,(?)病毒粒子数为108.71copies/mL的抗原液制备成油乳剂灭活苗。比较了甲醛及β-丙内酯的灭活效果,确定甲醛灭活终浓度为0.1%,BPL最佳灭活终浓度为0.05%倍稀释。进行疫苗成分最佳配比的优化,最后确认HLB 7.0,乳化剂含量10%,油水比为4：1的比例能提供最佳稳定性及免疫效果。剂型检验、稳定检测、粘度测定、无菌检验、安全性检测及保存期检测均达到成品疫苗所需要求,最小免疫剂量为0.25mL。疫苗免疫抗体水平的监测结果为在免疫后的第2周开始进行免疫抗体水平的检测。在免疫后的第4周,也就是免疫后的第28天,免疫鸡组的抗体水平达到了最高峰ELISA OD4500.96.而从免疫后第4周开始,抗体水平缓慢滑落,在免疫后第八周时维持ELISA OD4500.731的水平。根据免疫攻毒试验中免疫攻毒鸡的排毒及发病率判定,本课题所研制疫苗对免疫组鸡的保护率为100%,达到完全抵抗病毒的攻击。田间动物试验表明该疫苗在免疫初期FAV-1油苗抗体水平ELISA OD450可达1.103,达到预期免疫抗体水平,且在免疫后4个月内保持高效价(0.836)。而在免疫后5个月抗体水平出现滑坡,到免疫后6个月时保持在中等水平(0.595)。该苗对于免疫不同品种和年龄的鸡使用安全有效。

Ⅰ群禽腺病毒灭活油乳剂苗的研究

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