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基于猪圆环病毒Rep和Cap蛋白ELISA方法的建立及其应用

作　者: 李杰
导　师: 余兴龙
学　校: 湖南农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: PCV Rep蛋白 Cap蛋白 原核表达 间接ELISA 抗体检测
分类号: S855.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


本研究的主要目的是通过建立PCV2-Rep蛋白间接ELISA方法,与本实验室已建立的PCV2-Cap蛋白间接ELISA方法结合使用,对猪群中抗PCV2-Rep蛋白和抗PCV2-Cap蛋白抗体进行检测,从而描述猪群中PCV2抗体的产生规律及其流行情况。另外,本试验还初步建立了PCV1-Cap蛋白间接ELISA方法,用于检测猪群中PCV1的感染情况及其抗体对PCV2抗体检测的影响。通过基因合成、酶切和连接,我们成功构建了重组质粒pET-Rep2与pET-Cap1。将两个重组质粒分别转化入大肠杆菌表达菌BL21(DE3)中进行表达,SDS-PAGE电泳鉴定,重组Rep2蛋白分子量大约为40kDa,全部以包涵体形式表达；重组Capl蛋白分子量大约为32kDa,主要以可溶性表达。Western Blot分析表明重组蛋白Rep2和Capl都具有抗原性。通过Ni+亲和层析方法纯化重组Rep2和Capl蛋白,蛋白纯度均在95%以上。按照《The ELISA Guidebook》建立PCV2-Rep和PCV1-Cap蛋白间接ELISA方法,并进行条件优化。Rep2-ELISA方法与韩国金诺试剂盒和IFA实验进行了对比,表明其敏感性、特异性和一致性都较高。重复性试验的变异系数均小于10%,表明该方法重复性较好。因此,Rep2-ELISA方法可以用于猪群PCV2-Rep蛋白的抗体检测,具有较好的临床应用价值。PCV1-Cap蛋白间接ELISA方法也一样具有较高的特异性与可重复性。用PCV2-Rep、PCV1-Cap间接ELISA方法和本实验室已经建立的PCV2-Cap间接ELISA方法同时检测国内部分地区不同阶段猪血清,结果显示,PCV2-Rep阳性率为71.9%(527/816),PCV2-Cap阳性率为81.9%(668/816),PCV1-Cap阳性率为47.1%(216/459)。通过对PCV2 Rep和Cap蛋白抗体产生的动态变化研究表明,抗Rep2蛋白抗体产生的时间要比Cap2早2-3周,所以用Rep2-ELISA方法适合于PCV2早期感染的检测。

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医传染病学 > 病毒病
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