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副溶血弧菌耐药谱及其对头孢类药物抗性分析

作　者: 叶灵琼
导　师: 史贤明
学　校: 上海交通大学
专　业: 食品科学
关键词: 副溶血弧菌耐药谱 β-内酰胺酶头孢类药物 PCR
分类号: R446.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

副溶血弧菌广泛存在于近岸海水和鱼类、贝类等海洋生物中,是全世界范围内引起食源性疾病最常见的致病菌之一。但随着抗生素的大量使用,该菌的耐药性不断增加,其耐药机制主要与β-内酰胺酶有关,其中以超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和AmpCβ-内酰胺酶最具临床意义,因此对其耐药性方面研究具有重要意义。本研究旨在分析不同来源地副溶血弧菌病人分离株间以及病人与食品分离株间的耐药谱差异,检测其产β-内酰胺酶的状况,并确定该酶与菌株头孢类抗生素抗性之间以及菌株产毒力基因与产酶能力之间的关系。因此,针对实验室保藏的177株副溶血弧菌分离株,其中127株病人分离株分别来自上海、宁波和舟山,50株食品分离株分别来自国内和国外,主要进行了以下三个方面的实验:一、各地副溶血弧菌病人和食品分离株抗生素耐药谱调查本研究根据抗微生物药物敏感性试验执行标准,选取了涵盖治疗肠杆菌科允许使用药物所有种类,采用传统纸片扩散法调查177株副溶血弧菌分离株对18种抗生素的耐药谱。结果表明,副溶血弧菌病人分离株的主要耐药谱比较相似,耐药谱涉及12种抗生素,其中主要对阿莫西林/克拉维酸、头孢噻吩、氨苄西林三种抗生素具有抗性。各地的耐药严重程度为上海地区最高,舟山地区次之,宁波地区最低。相比病人分离株,食品分离株显得耐药谱更窄,耐药菌株数量更少。二、β-内酰胺酶的检测和MIC值的测定本研究根据耐药表型结果,从177株菌株中选出能够对头孢唑林、头孢噻吩、头孢噻肟、头孢他啶等产生耐药及中介耐药菌株,共70株。通过纸片法和三维试验法对菌株是否产ESBLs和Amp-C酶进行检测,并针对这些菌株做了三代头孢类抗生素的最小抑菌浓度值(MIC)测定。结果表明,只有病人分离株能够产ESBLs和AmpC酶,能产ESBLs酶的为12株,占总病人分离株数目约9.4%,能产AmpC酶的为6株,占总病人分离株数目约4.7%,同时能产该两种酶的仅有两株。相比病人分离株,研究中未发现存在食品分离株能够产ESBLs或AmpC酶。MIC值表明产此类酶的菌株并不会对所有第三代头孢类抗生素具有抗性,这也能够说明产酶菌株对于同代头孢类抗生素的敏感程度是有区别的。三、产酶菌株毒力基因检测为了研究副溶血弧菌产毒能力与产β-内酰胺酶能力之间是否存在一定联系,本研究将16株产酶菌株,分别做副溶血弧菌毒力基因tdh和trh特异性引物的PCR检测。结果表明,12株产ESBLs酶菌株中,10株来自金山,有9株产tdh毒素,0株产trh毒素。6株产AmpC酶菌株中,6株来自金山,有株产tdh毒素,1株产trh毒素,未发现菌株毒力基因与产酶能力存在一定的关联。通过以上三个方面对副溶血弧菌耐药领域的研究,不仅对目前副溶血弧菌耐药谱大体趋势有了一定的摸索和数据统计,同时也根据耐药谱掌握了菌株对于某几类抗生素具有抗性的情况,对于临床治疗、研究其耐药机理和耐药基因检测方面起到了指导作用。

全文目录

摘要  6-9
ABSTRACT  9-14
英文缩略语索引  14-15
第一章绪论  15-34
  1 副溶血弧菌基本情况  15-21
    1.1 副溶血弧菌生物学特征  15-16
    1.2 副溶血弧菌的致病因子  16-19
    1.3 副溶血弧菌的分布和临床特征  19
    1.4 副溶血弧菌的流行病学调查  19-21
  2 副溶血弧菌药敏试验概况  21-24
    2.1 药敏试验方法  21-23
    2.2 影响药敏结果的因素  23-24
    2.3 药敏试验的应用  24
  3 副溶血弧菌的耐药机制研究  24-29
    3.1 产生灭活酶或钝化酶  25
    3.2 药物作用靶位改变  25-26
    3.3 细胞膜渗透性改变  26
    3.4 主动药物外排机制  26-27
    3.5 生物被膜的形成  27-28
    3.6 生物小境的形成  28-29
  4 副溶血弧菌检测方法研究现状  29-32
    4.1 标准方法  29-30
    4.2 KP 溶血试验  30
    4.3 免疫学方法  30
    4.4 核酸杂交  30
    4.5 乳胶凝集试验  30-31
    4.6 PCR 法  31-32
    4.7 基因芯片技术  32
  5 研究的目的与意义  32-34
第二章副溶血弧菌病人分离株和食品分离株抗生素耐药谱研究  34-53
  前言  34
  1 材料与方法  34-37
    1.1 菌种  34-35
    1.2 培养基及其他材料  35-36
    1.3 仪器和设备  36-37
  2 实验方法  37-39
    2.1 调整菌液浓度  37-38
    2.2 涂MH 平板  38
    2.3 贴药敏纸片  38
    2.4 测量抑菌圈大小  38
    2.5 以质控菌为参照  38-39
  3 结果  39-50
    3.1 所有病人分离株药敏结果  39-41
    3.2 上海地区病人分离株药敏结果  41-42
    3.3 病人分离株药敏试验表型统计  42-45
    3.4 上海病人分离株药敏试验表型统计  45-47
    3.5 所有食品分离株药敏结果  47-48
    3.6 食品分离株药敏表型统计  48-50
  4 讨论  50-53
第三章副溶血弧菌耐药菌株β-内酰胺酶的检测和头孢类抗生素MIC 值的测定  53-71
  前言  53
  1 材料与方法  53-57
    1.1 菌种  53-54
    1.2 培养基与其他材料  54-56
    1.3 主要仪器  56-57
  2 实验方法  57-62
    2.1 ESBLs 的检测  57-58
    2.2 Amp-C 酶的检测  58-59
    2.3 产酶菌株MIC 测定  59-61
    2.4 产酶菌株毒力基因PCR 检测  61-62
  3 结果  62-69
    3.1 产ESBLs 和AmpC 菌株  62-65
    3.2 最小抑菌浓度值测定  65-66
    3.3 产酶菌株毒力基因检测情况  66-69
  4 讨论  69-71
第四章总结与展望  71-73
参考文献  73-83
致谢  83-84
攻读学位期间发表的学术论文  84

副溶血弧菌耐药谱及其对头孢类药物抗性分析

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