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CTGF和TIMP-1shRNA表达质粒共转染对肝星状细胞细胞因子及细胞外基质分泌的影响

作　者: 孙华丽
导　师: 张建军
学　校: 泸州医学院
专　业: 内科学
关键词: RNA干扰短发夹RNA 结缔组织生长因子基质金属蛋白酶组织抑制因子-1 共转染肝纤维化
分类号: R575.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：研究结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1 (Tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1)短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达质粒重组体分别转染及共转染肝星状细胞(Hepatic stellate cell T6,HSC-T6)后CTGF、TIMP-1、procol-α1 mRNA基因表达及细胞外基质(Extracellular matrix, ECM)分泌的影响,来探索肝纤维化的发生机制。方法：将已筛选并成功构建靶向大鼠CTGF和TIMP-1最有效的RNA干扰靶位的shRNA表达质粒重组体,以转染试剂Lipfectamine 2000分别及共转染经TGF-β1刺激活化的大鼠HSC-T6,另设空质粒组、只加转染试剂组及空白对照组,每组6复孔,流式细胞仪分析转染效率；36h后抽提RNA并逆转录成cDNA通过荧光定量PCR检测各组细胞中CTGF/TIMP-1、procol-α1 mRNA的表达；放射免疫法(Radioimmunoassay, RIA)分析细胞上清液中Ⅲ型前胶原(Procollagentype-Ⅲ,PCⅢ)、透明质酸(Hexadecenoic acid, HA)和层粘连蛋白(laminin, LN)的含量。结果：与空白对照组相比,空质粒对照组、只加转染试剂组对基因表达及ECM的分泌均无影响,而CTGFshRNA和TIMP-1 shRNA能明显抑制CTGF、TIMP-1、procol-α1 mRNA的表达,降低上清液中PCⅢ、HA和LN的含量,双重组质粒共转染HSC-T6后其对procol-α1 mRNA和ECM的抑制程度优于单重组质粒转染(P<0.01或P<0.05)。结论：1.CTGFshRNA、TIMP-1shRNA可明显抑制HSC的CTGF、TIMP-1、procol-α1基因表达及ECM的分泌,且联合干扰较单独干扰效果更强。2.多基因共转染作为抗纤维化基因治疗的方法,其治疗效果可能会优于单基因转染。

全文目录

1 CTGF和TIMP-1shRNA表达质粒共转染对肝星状细胞细胞因子及细胞外基质分泌的影响  3-43
  1.1 中文摘要  3-5
  1.2 英文摘要  5-7
  1.3 前言  7-9
  1.4 材料与方法  9-26
  1.5 结果  26-32
  1.6 讨论  32-37
  1.7 结论  37-38
  1.8 参考文献  38-42
  1.9 英汉缩略词对照表  42-43
2 致谢  43-44
3 基质金属蛋白酶及其抑制因子与肝纤维化(综述)  44-54
  参考文献  50-54

CTGF和TIMP-1shRNA表达质粒共转染对肝星状细胞细胞因子及细胞外基质分泌的影响

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