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自制组织芯片研究TERC、Ezrin和Galectin-3在宫颈鳞癌发生过程中的临床病理意义

作　者: 袁艳龙
导　师: 何春年
学　校: 河北医科大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 宫颈鳞癌宫颈上皮内瘤变 TERC基因 Ezrin Galectin-3 荧光原位杂交免疫组织化学组织芯片
分类号: R737.33
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的:子宫颈癌是危害女性生命健康的常见恶性肿瘤之一。死亡率仅次于乳腺癌,居于第二位。近年随着宫颈癌筛查的全面开展,其发病率已大大降低,但人们对宫颈癌的早期诊断和防治方面研究从未停止。近来研究表明,宫颈鳞状细胞由非典型性增生向宫颈鳞癌转变的过程中几乎都有3号染色体长臂的多拷贝,其中最重要的是位于3q26.3的TERC基因,该基因的扩增可阻止细胞凋亡、导致肿瘤发生。3号染色体长臂多拷贝及TERC基因的扩增对鉴别宫颈细胞高度癌前病变与低度癌前病变的敏感性及特异性均在90%以上,检测TERC基因的扩增极有助于宫颈鳞癌的筛查及早期诊断。Ezrin蛋白是一种膜细胞骨架连接蛋白,在细胞形态形成、运动、黏附及细胞信号转导等多项细胞活动中发挥重要作用。各种细胞膜外信号可通过Ezrin蛋白与膜整合蛋白直接连接而传入细胞内,引起肿瘤发生,其过度表达可能在宫颈鳞癌的发生发展过程中发挥重要作用。对其靶向治疗可能成为肿瘤治疗的又一新途径。Galectins-3是凝集素家族中的一员,参与细胞的增殖、分化、局部免疫调节和凋亡等,与肿瘤的生长、黏附、浸润及转移密切相关。对其研究有可能为宫颈鳞癌的早期诊断和治疗提供新的思路和方法。本课题采用组织芯片、荧光原位杂交技术对TERC基因进行研究,并免疫组化检测Ezrin、Galectin-3蛋白在宫颈正常鳞状上皮、CIN及宫颈鳞癌等组织中的表达,探讨TERC、Ezrin、Galectin-3与宫颈不同程度病变及临床病理的关系及三者在宫颈鳞癌的发生、发展中存在的作用及其相互之间可能存在的关系,分析其在宫颈病变诊断中的作用。方法:1收集宫颈组织样本共196例,其中宫颈鳞癌48例,宫颈CIN组织120例(各级别CIN病变各40例),正常宫颈组织28例。2应用自制组织芯片技术,将196例供体标本按阵列设计顺序依次放入受体蜡块中,融合、切片制成需要的组织芯片。3采用荧光原位杂交技术检测TERC基因在宫颈鳞癌、宫颈CIN组织及正常宫颈鳞状上皮组织中的扩增情况。4采用免疫组织化学技术(SP法)检测宫颈鳞癌、宫颈CIN组织、正常宫颈鳞状上皮组织中Ezrin及Galectin-3蛋白的表达情况。5采用SPSS16.0统计软件进行统计学处理,以α=0.05为检验水准,当P<0.05时具有统计学意义。结果:1组织芯片制备及染色结果依据课题设计及试验方法要求共制作7×7阵列组织芯片4张,组织点阵排列整齐,无点阵移位现象,有3个位点缺失,18个位点无有意义的组织,其他位点组织均见有意义的组织,结果共得有意义样本175例(宫颈鳞癌48例,CINⅢ33例,CINⅡ36例,CINⅠ34例,正常宫颈鳞状上皮24例),组织位点的形态可观测率为89.3%。HE染色无脱片、异位和皱折,荧光原位杂交信号清晰、背景干净,免疫组织化学染色阳性定位清楚,背景干净,无掉片现象。2 TERC基因在子宫颈上皮不同病变中的扩增情况采用荧光原位杂交方法检测48例宫颈鳞癌、103例CIN(包括CINⅢ33例, CINⅡ36例, CINⅠ34例),24例正常宫颈鳞状上皮中TERC基因的扩增情况。结果显示:正常宫颈鳞状上皮中TERC基因无扩增,CINⅠ11.8%(4/34)、CINⅡ44.4%(16/36)、CINⅢ69.7%(23/33)及宫颈鳞癌83.3%(40/48),随着病变级别的增高,TERC基因扩增率逐渐增加,差异有统计学意义(p<0.05);高级别CIN病变中出现3号染色体多拷贝细胞,宫颈鳞癌病例中检测到TERC基因的明显扩增和多量的3号染色体多拷贝肿瘤细胞。TERC基因在宫颈鳞癌、CINⅢ和CINⅡ中的扩增率明显高于CINⅠ及正常宫颈鳞状上皮,差异有统计学意义(p<0.05);CINⅡ与宫颈鳞癌之间差异有统计学意义(p<0.05);CINⅢ与宫颈鳞癌、正常宫颈鳞状上皮与CINⅠ之间差异无统计学意义(p>0.05)。TERC基因扩增在鉴别高级别CIN病变(CINⅢ、CINⅡ)与低级别CIN病变(CINⅠ)中的敏感度为56.5%,特异度为88.2%,准确度为67%,阳性预测值为90.7%,阴性预测值为50.0%。3 Ezrin蛋白在子宫颈上皮不同病变中的表达情况采用免疫组织化学SP法检测48例宫颈鳞癌、103例CIN(包括33例CINⅢ,36例CINⅡ,34例CINⅠ)及24例正常宫颈鳞状上皮组织中Ezrin蛋白的表达。在正常宫颈鳞状上皮中,Ezrin蛋白主要在细胞膜上少量表达或不表达,从正常宫颈鳞状上皮8.3%(2/24)、CINⅠ26.5%(9/34)、CINⅡ58.3%(21/36)、CINⅢ51.5%(17/33)到宫颈鳞癌66.7%(32/48),其强阳性表达率逐渐增加且为明显的细胞质表达,差异有统计学意义(p<0.05)。Ezrin蛋白在宫颈鳞癌及CINⅢ、CINⅡ中的强阳性表达率均高于正常宫颈鳞状上皮及CINⅠ组,差异有统计学意义(p<0.05);宫颈鳞癌、CINⅢ、CINⅡ之间差异无统计学意义(p>0.05);正常宫颈鳞状上皮与CINⅠ之间差异无统计学意义(p>0.05)。4 Galectin-3在子宫颈上皮不同病变中的表达情况采用免疫组织化学SP法检测48例宫颈鳞癌、103例CIN(包括33例CINⅢ,36例CINⅡ,34例CINⅠ)及24例正常宫颈鳞状上皮组织中的表达。正常宫颈鳞状上皮中Galectin-3少量表达于中层细胞的胞质中,从正常宫颈鳞状上皮0%(0/24)、CINⅠ5.9%(2/34)、CINⅡ19.4%(7/36)、CINⅢ24.2%(8/33)到宫颈鳞癌25.0%(12/48),其强阳性表达率逐渐升高且出现少量细胞核的阳性表达,差异有统计学意义(p<0.05)。Galectin-3在宫颈鳞癌、CINⅢ及CINⅡ中的表达明显高于正常宫颈鳞状上皮,差异有统计学意义(p<0.05);宫颈鳞癌与CINⅠ之间差异有统计学意义(p<0.05);其他组间比较差异均无统计学意义(p>0.05)。5子宫颈鳞癌中TERC基因扩增与Ezrin、Galectin-3表达的相关性分析在子宫颈鳞癌中TERC基因的扩增与Ezrin蛋白的表达具有相关性(p<0.05),二者呈正相关,r = 0.516。TERC基因扩增、Ezrin蛋白的表达与Galectin-3的表达之间均无相关性(p>0.05), rTERC与galectin-3=-0.052,r Ezrin与galectin-3 =-0.252。6宫颈鳞癌组织中TERC基因扩增、Ezrin蛋白及Galectin-3的表达与患者年龄、肿瘤大小、分化程度、临床分期、淋巴结转移情况及病理分级之间的关系TERC基因扩增与患者年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结转移情况及病理分级之间均无明显相关性(p>0.05),与临床分期有显著相关性(p<0.05)。Ezrin表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、病理分级及临床分期之间均无明显相关性(p>0.05),与淋巴结转移之间有显著相关性(p<0.05)。Galectin-3表达与年龄、性别、肿瘤大小、病理分级、临床分期及淋巴结转移之间均无明显相关性(p>0.05)。结论:1荧光原位杂交检测TERC基因扩增在正常宫颈组织中无扩增,在高级别的CIN病变和宫颈鳞癌中明显扩增,并伴有3号染色体多拷贝细胞数量的增多,在鉴别诊断CINⅠ与CINⅡ时有明显的临床实用意义。2荧光原位杂交检测TERC基因扩增在鉴别高级别CIN病变与低级别CIN病变时有较高的特异度、阳性预测值及准确度,对CIN病变的发展具有临床预测价值。3免疫组化方法检测Ezrin蛋白的阳性表达率从正常宫颈鳞状上皮、CIN到宫颈鳞癌逐渐增高,可辅助宫颈病变的诊断,具有临床实用价值。4免疫组化方法检测Galectin-3的阳性表达率从正常宫颈鳞状上皮、CIN到宫颈鳞癌逐渐增高。5宫颈鳞癌中,TERC基因扩增与Ezrin蛋白异常表达有相关性,二者呈正相关。提示TERC基因和Ezrin蛋白在宫颈鳞癌的诊断过程中可以协同检测。6在宫颈鳞癌组织中TERC基因扩增与临床分期有相关性,Ezrin蛋白异常表达与淋巴结转移有相关性。7组织芯片手工制做,程序简单、经济方便,是一种简便可行,高效稳定的技术方法,能满足相关科研课题和实际工作的需要。

自制组织芯片研究TERC、Ezrin和Galectin-3在宫颈鳞癌发生过程中的临床病理意义

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