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结核分枝杆菌MPT64基因重组腺病毒疫苗对小鼠血清IL-12/IFN-γ水平的影响

作　者: 龚梅
导　师: 胡成平
学　校: 中南大学
专　业: 呼吸内科
关键词: 结核分枝杆菌 MPT64 重组腺病毒疫苗免疫原性免疫保护 MPT64特异性抗体 IFN-γ IL-12
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：检测实验疫苗的免疫原性及其对感染结核小鼠的免疫保护效力,为新型结核疫苗的研究及筛选提供依据。方法：将50只6-8周龄,体重16-18g,雌性C57BL／6小鼠随机分为5组(A为阴性对照组、B为阳性对照组、C为空载体组、D为实验疫苗组、E为卡介苗组),各组10只,每组再分为免疫原性组4只,保护效力组6只。A、B组每只双侧胫前肌各缓慢注射生理盐水50uL；C组每只双侧胫前肌各缓慢注射重组腺病毒50uL；D组每只双侧胫前肌各缓慢注射结核分枝杆菌MPT-64基因重组腺病毒疫苗50uL。上述四组每隔2周注射一次,共免疫三次。E组按卡介苗说明书以1mL稀释液溶解冻干粉末,每只小鼠尾部皮内注射100uL,只免疫一次,于其他组首次免疫时进行。末次免疫4周后取各组免疫原性组小鼠,采用摘眼球法采血,分离血清存于-20度冰箱待检。B、C、D、E组中保护效力组小鼠用5×106CFU／mL H37Rv菌悬液经尾静脉注射攻毒,每只小鼠尾静脉注射0.5mL菌悬液,A组小鼠仍予生理盐水,4周后摘眼球取血,分离血清-20度冰箱待检。所收集标本均采用ELISA法检测血清中抗MPT64蛋白特异性抗体、细胞因子IFN-γ及IL-12水平。结果：实验疫苗可刺激小鼠产生较高水平的抗MPT64蛋白特异性抗体,且其水平显著高于阴性对照组、阳性对照组、空载体组和卡介苗组。免疫原性组及保护效力组结果均显示：实验疫苗血清IFN-γ、IL-12水平显著高于阴性对照组、阳性对照组及空载体组,而与卡介苗组差异无统计学意义。结论：结核分枝杆菌MPT64基因重组腺病毒疫苗可诱导小鼠产生特异性的体液及细胞免疫,其免疫原性及保护效力与卡介苗相当,可作为新型结核疫苗研究的候选疫苗。

全文目录

中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-8
目录  8-9
缩略词表  9-10
第一章前言  10-14
第二章材料与方法  14-17
  2.1 材料与方法  14-16
    2.1.1 菌株、细胞株和实验疫苗来源  14
    2.1.2 实验动物  14
    2.1.3 主要试剂  14
    2.1.4 主要仪器  14
    2.1.5 方法  14-16
      2.1.5.1 细胞的培养  14
      2.1.5.2 重组腺病毒载体和结核分枝杆菌MPT-64基因重组腺病毒疫苗的扩增  14-15
      2.1.5.3 免疫小鼠  15
      2.1.5.4 结核分枝杆菌(H37Rv标准毒力株)攻击  15
      2.1.5.5 ELISA法检测血清特异性IgG抗体  15
      2.1.5.6 血清细胞因子INF-γ及IL-12测定  15-16
  2.2 统计学分析  16-17
第三章结果  17-20
  3.1 血清抗MPT64特异性抗体水平  17
  3.2 小鼠血清细胞因子IFN-γ及IL-12水平的检测  17-20
第四章讨论  20-23
第五章结论  23-24
参考文献  24-27
综述新型结核疫苗研究进展之研究策略  27-39
致谢  39

结核分枝杆菌MPT64基因重组腺病毒疫苗对小鼠血清IL-12/IFN-γ水平的影响

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