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噬菌体肽库筛选克伦特罗和莱克多巴胺模拟表位的研究

作　者: 陈曙
导　师: 马岚
学　校: 清华大学
专　业: 生物学
关键词: 克伦特罗 莱克多巴胺 噬菌体十二肽库 酶联免疫吸附
分类号: S859.84
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 29次
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内容摘要


应用克伦特罗特异性的单克隆抗体从噬菌体十二肽库中筛选出该单抗的抗原模拟表位多肽,获取该模拟表位多肽序列;采用同样的方法获得莱克多巴胺的抗原模拟表位多肽序列;将合成的克伦特罗模拟表位多肽和莱克多巴胺的模拟表位多肽一起偶联到大蛋白OVA上,作克伦特罗与莱克多巴胺并行ELISA检测。应用两株克伦特罗单克隆抗体14C5b2和6G7d筛选噬菌体十二肽库,对展示与单抗有亲和力多肽的噬菌体克隆作竞争性ELISA实验鉴定,序列测定获得多肽序列FSYLPEWGRFER;应用莱克多巴胺单克隆抗体2F6b筛选噬菌体十二肽库,应用同样的方法对噬菌体克隆作竞争性ELISA分析,获得多肽序列YSKTTMPPAPSS;合成这两条多肽,并与大蛋白OVA偶联,成功地将这些偶联物作竞争性ELISA并行检测抗原克伦特罗和莱克多巴胺。结果表明模拟表位多肽能有效的作为抗原替代物用于这些ELISA实验中,同时表明设计并行检测两种抗原的ELISA实验具有一定的可行性。这些结果对提高克伦特罗和莱克多巴胺检测的安全性和降低检测成本具有重要作用,同时是对并行检测两种抗原的一种尝试。

全文目录


摘要  2-3
Abstract  3-6
第1章 引言  6-20
  1.1 盐酸克伦特罗与莱克多巴胺  6-14
    1.1.1 瘦肉精概述  6-7
    1.1.2 盐酸克伦特罗（CLB）综述  7-13
    1.1.3 莱克多巴胺概述  13-14
  1.2 噬菌体展示技术  14-17
  1.3 选题背景及意义  17-18
  1.4 论文各部分的主要内容  18-20
第2章 材料与方法  20-39
  2.1 实验材料  20-21
    2.1.1 生化试剂  20-21
    2.1.2 主要仪器设备  21
    2.1.3 重要耗材  21
    2.1.4 筛选所用的 CLB 单抗和Rac 单抗  21
  2.2 实验方法  21-39
    2.2.1 试剂配制  21-24
    2.2.2 盐酸克伦特罗（CLB）的噬菌体十二肽库筛选  24-30
    2.2.3 莱克多巴胺（Rac）的噬菌体十二肽库筛选  30-31
    2.2.4 CLB 模拟表位多肽和Rac 模拟表位多肽的合成偶联  31
    2.2.5 CLB 模拟表位多肽FC-OVA 偶联物的ELISA 实验  31-33
    2.2.6 Rac 模拟表位多肽YS-OVA 偶联物的ELISA 实验  33-34
    2.2.7 多肽FC-YS-OVA 偶联物的ELISA 实验  34-39
第3章 结果与讨论  39-59
  3.1 盐酸克伦特罗（CLB）的噬菌体十二肽库筛选  39-43
    3.1.1 应用单克隆抗体14C562进行十二肽库筛选  39-41
    3.1.2 应用CLB 单克隆抗体6G7d 进行十二肽库筛选  41-43
  3.2 莱克多巴胺（Rac）的噬菌体十二肽库筛选  43-45
    3.2.1 亲和性筛选对噬菌体的富集  43
    3.2.2 噬菌体阳性克隆的挑选与初步鉴定  43-44
    3.2.3 间接竞争 ELISA 筛选Rac 抗原模拟表位  44-45
    3.2.4 阳性噬菌体克隆测序  45
  3.3 CLB 模拟表位多肽和 Rac 模拟表位多肽的合成与偶联  45
  3.4 CLB 模拟表位多肽 FC-OVA 偶联物的ELISA 实验  45-48
    3.4.1 方阵滴定法确定 FC-OVA 最佳包被浓度和单抗的浓度  45-46
    3.4.2 FC-OVA 与CLB 间接竞争单抗的 ELISA 标准曲线的建立  46-48
  3.5 Rac 模拟表位多肽YS-OVA 偶联物的ELISA 实验  48-50
    3.5.1 方阵滴定法确定 YS-OVA 最佳包被浓度和单抗的浓度  48
    3.5.2 YS-OVA 与Rac 间接竞争单抗的 ELISA 标准曲线的建立  48-50
  3.6 多肽FC-YS-OVA 偶联物的ELISA 实验  50-56
    3.6.1 多肽FC-YS-OVA 偶联物单独检测CLB 抗原的ELISA 实验  50-52
    3.6.2 多肽FC-YS-OVA 偶联物单独检测Rac 抗原的ELISA 实验  52-54
    3.6.3 多肽FC-YS-OVA 偶联物并行检测CLB 和Rac 抗原的 ELISA 实验  54-56
  3.7 讨论  56-59
    3.7.1 噬菌体肽库筛选的讨论  56
    3.7.2 ELISA 实验部分的讨论  56-59
第4章 结论  59-60
参考文献  60-63
致谢  63-64
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果  64

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医药物学 > 兽医毒物学 > 动物性食品中化学物残留
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