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从噬菌体十二肽库中筛选NF-κB p65亚基亲和肽的研究

作　者: 闫海涛
导　师: 丁日高
学　校: 中国人民解放军军事医学科学院
专　业: 防化医学
关键词: 核因子-κB(NF-κB) p65亚基噬菌体展示技术:噬菌体十二肽库
分类号: Q789
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)是一种重要的核转录因子,可被多种刺激因素激活,并易位至细胞核,与相应的靶基因结合,启动基因转录。NF-κB的靶基因包括编码细胞因子、粘附分子、诱导型一氧化氮合酶等的基因,因此与多种炎性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤的发生有关。NF-κB已成为了疾病治疗的重要靶标。本实验室在化学性急性肺损伤研究研究中也发现,全氟异丁烯吸入中毒导致的急性肺损伤,其中NF-κB也表现为过度表达,表明NF-κB的异常激活与急性肺损伤的发生密切相关。噬菌体展示技术是寻找小肽拮抗分子的最有效的方法之一,该技术已在蛋白质结构研究、抗原表位分析、人工抗体制备、细胞因子拮抗剂的研究和寻找细胞内传递蛋白等研究中有广泛的应用,并在寻找导向小分子方面已取得了令人振奋的进展。因此本研究通过基因工程技术构建重组表达的NF-κB p65的表达载体,并对表达产物进行分离、纯化。以表达的GST-NF-κB p65(GST-p65)融合蛋白为靶标,利用噬菌体十二随机肽库筛选NF-κB p65亚基结合肽,为寻找NF-κB特异性抑制剂奠定基础。根据人NF-κB p65亚基基因序列设计引物,以pEGFP/p65质粒为模板PCR扩增得到NF-κB p65基因,将该基因克隆到克隆载体pGEM-T,获得克隆重组质粒pGEM-T/p65。将克隆重组质粒中的目的基因片段进行序列测定并与人NF-κB p65基因进行比较,结果序列一致读码框没有发生改变。从克隆重组质粒上切下目的基因片段,将该基因克隆到谷胱甘肽S转移酶(glutathione S-transferase,GST)融合表达载体pGEX-4T-2上,在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达。得到的GST-p65

全文目录

缩略词表  4-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
前言  9-12
第一部分 NF-κB p65亚基的克隆、表达和纯化  12-33
  一、实验材料  12-17
  二、实验方法  17-25
  三、实验结果  25-31
  四、讨论  31-32
  五、小结  32-33
第二部分 NF-κB p65亚基亲和肽的筛选  33-43
  一、实验材料  33-35
  二、实验方法  35-38
  三、实验结果  38-42
  四、讨论  42-43
  五、小结  43
总结  43-44
参考文献  44-47
论文综述  47-59
个人简历  59-60
致谢  60

从噬菌体十二肽库中筛选NF-κB p65亚基亲和肽的研究

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