学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

酿酒酵母SOD1基因在抗环境胁迫中的作用

作　者: 黄雪芹
导　师: 蒋伶活
学　校: 天津大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 酿酒酵母 胁迫抗性 SOD1 Msn2/4p
分类号: Q93
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 36次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


酿酒酵母Sod1p是铜-锌-超氧化物歧化酶,两分子Sod1p亚基与一分子Cu2+和一分子Zn2+组成具有生物活性的复合物,该复合物可以将细胞内O2-催化分解成H2O2,H2O2进一步被过氧化氢酶催化分解成H2O和O2,使细胞免受超氧基的损害。Ccs1p是Sod1p的铜离子伴侣蛋白,为Sod1复合物提供Cu2+。通过筛选酿酒酵母缺失株文库对Rap的敏感和抗性情况,我们发现酿酒酵母sod1和ccs1缺失株对Rap具有明显的抗性,且这种抗性与胞外Cu2+浓度有关,这说明sod1和ccs1缺失株对Rap的抗性是依赖于Sod1p的超氧化物歧化酶活性的。然后通过遗传学表型筛选的方法研究了Sod1p在多种胁迫响应中的作用,首次发现了sod1缺失株对SDS,CongoRed,pH 8.0的敏感表型,表明了Sod1p在细胞对这些胁迫条件耐受性方面发挥一定的作用。为了进一步研究SOD1基因的功能,我们构建了能够表达Sod1-HA融合蛋白的多拷贝质粒pHAC181-SOD1和单拷贝质粒pHAC111-SOD1,并通过功能互补实验验证了其具有生物学功能。通过序列分析,我们在SOD1的启动子部分发现了STRE序列,这暗示SOD1可能被胁迫转录因子Msn2/4p所调控。然后用Western Blot的方法,检测了在0.4 M NaCl存在情况下,野生型菌株及msn2/4缺失株中Sod1p的表达情况。从蛋白水平证明了,SOD1在高渗胁迫应答中发挥重要作用,且Msn2/4p参与对Sod1p表达的调控。

全文目录


中文摘要  3-4
ABSTRACT  4-7
第一章 文献综述  7-14
  1.1 酿酒酵母简介  7-9
    1.1.1 酵母及酿酒酵母  7
    1.1.2 酿酒酵母作为模式生物  7-9
  1.2 TOR protein kinase  9-10
  1.3 SOD1 和CCS1  10-11
  1.4 SOD1 和胁迫应答  11-12
  1.5 MSn2/4p  12-13
  1.6 本论文的研究内容和意义  13-14
第二章 实验材料与方法  14-29
  2.1 实验材料  14-18
    2.1.1 菌种及质粒  14-15
    2.1.2 主要实验仪器  15-16
    2.1.3 试剂  16-17
    2.1.4 培养基  17-18
  2.2 实验方法  18-29
    2.2.1 常用溶液与缓冲液的配制  18-20
    2.2.2 实验方法  20-29
第三章 酿酒酵母SOD1 基因的抗环境胁迫功能初探  29-33
  3.1 酿酒酵母ccs1 和sod1 缺失株对Rap抗性的验证及机理初探  29-31
    3.1.1 抗性验证  29-30
    3.1.2 机理初探  30-31
  3.2 酿酒酵母ccs1 和sod1 缺失株表型筛选实验  31-32
  3.3 本章结论  32-33
第四章 酿酒酵母SOD1 与ccs1 基因的克隆  33-45
  4.1 多拷贝质粒pHAC181- SOD1 和pHAC181- ccs1 的构建  33-38
    4.1.1 酿酒酵母SOD1 和ccs1 基因片段的PCR扩增  33-35
    4.1.2 DNA片断和载体质粒的酶切  35-36
    4.1.3 DNA的连接与重组质粒的检测  36-38
  4.2 单拷贝质粒pHAC111-SOD1 和pHAC111-ccs1 的构建  38-43
    4.2.1 DNA片断的酶切  38-39
    4.2.2 DNA片断的切胶回收和载体的酶切  39-41
    4.2.3 DNA的连接与重组质粒的检测  41-43
  4.3 功能互补实验  43-44
  4.4 本章小结  44-45
第五章 酿酒酵母SOD1 与转录因子M5112/4p关系的研究  45-50
  5.1 引言  45
  5.2 序列分析  45-46
  5.3 YPH250（WT）和m5112/4 缺失株中Sod1p蛋白的表达  46-49
    5.3.1 细胞处理  47
    5.3.2 Western Blot 检测  47-49
  5.4 本章小结  49-50
第六章 总结  50-51
参考文献  51-55
发表论文和科研情况说明  55-56
致谢  56

相似论文

  1. 产甘油益生菌的分离鉴定及其发酵条件的优化,S823.5
  2. 酿酒酵母代谢木糖工程菌的构建,Q78
  3. 转萝卜过氧化物酶基因RsPrx1酵母表达条件优化及其抗性机理研究,Q943.2
  4. 酿酒酵母醛酮还原酶Gre2的结构与功能研究,Q936
  5. 低聚半乳糖的纯化研究,TS201.2
  6. 酿酒酵母skp1和rav2基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达,Q78
  7. 酿酒酵母NADH激酶Pos5p在细胞抵抗氧化胁迫中的作用,Q93
  8. 酿酒酵母HOR2基因缺失突变株的构建及其生物学性质研究,Q78
  9. 酿酒酵母细胞PKA高活性与细胞热击抗性的研究,Q932
  10. 本土葡萄酒酵母的选育及低醇葡萄酒的酿造,TS262.6
  11. 脂肪酸碳链延长酶与脱饱和酶在酿酒酵母中共表达,Q78
  12. 酿酒酵母ALD4基因敲除与GPD1基因沉默研究,Q78
  13. 酵母基因组中钙离子平衡相关基因的初步研究,Q75
  14. 酵母基因组序列分析,Q75
  15. 毕赤酵母木糖还原酶的改造及重组酿酒酵母发酵木糖生产乙醇的初步研究,TQ223.122
  16. 产乙醇菌株的选育及木糖代谢关键酶基因的克隆,TQ223.122
  17. 不同处理对棉籽饼产物中游离和结合棉酚含量的影响,S816
  18. 表达结核杆菌融合抗原的重组酿酒酵母免疫效果研究,R392
  19. 颗粒裂解肽抗菌结构域的重组表达和生物活性分析,Q51
  20. 优良刺葡萄酒酵母的选育及应用研究,TS262.6
  21. 木糖还原酶基因的克隆及在酿酒酵母中的表达,Q78

中图分类: > 生物科学 > 微生物学
© 2012 www.xueweilunwen.com