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微小RNA miR-193b对乳腺癌转移的影响和分子调控机制的研究

作　者: 李新峰
导　师: 邵志敏；严培军
学　校: 复旦大学
专　业: 疾病蛋白质组
关键词: 乳腺癌肿瘤转移 miR-193b uPA(尿激酶型纤溶酶原激活物) 3’-UTR(3’untranslated region)
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:探讨小RNA miR-193b对乳腺癌细胞侵袭和转移的影响及其作用机制方法:采用microRNA array的手段检测乳腺癌细胞MDA-MB-231和其肺高转移潜能细胞株(MDA-MB-231-HM)的microRNA表达谱差异。利用生物信息学的方法和其他实验手段去寻找microRNA的分子靶点。uPA是miR-193b的一个可能的分子靶点。把uPA基因的3’UTR装载荧光报告基因载体上面,使其与报告基因的3’UTR融合。利用重组后的荧光报告基因检测miR-193b是否能直接作用与uPA。并且在乳腺癌细胞MDA-MB-231和MDA-MB-435中过表达miR-193b,利用westernblot和real-time PCR的手段检测miR-193b对细胞内源uPA表达水平的影响。构建稳定表达miR-193b的细胞株MDA-MB-231和MDA-MB-435。利用Transwell和细胞增殖检测的手段检测miR-193b对乳腺癌细胞侵袭和增殖能力的影响。并且把稳定转染株细胞注射裸鼠乳腺,观察移植瘤生长曲线和肺部转移灶的变化。随机挑选复旦大学附属肿瘤医院乳腺外科2001-2004年,经病理确诊的乳腺癌临床组织标本80例,按淋巴结阳性和阴性分为两组,通过免疫组化检测uPA的表达。通过Real-time PCR检测组织中miR-193b和uPA的mRNA表达水平。结果:过表达miR-193b能够降低带有uPA的3’UTR的荧光质粒的表达效率。并且miR-193b能够抑制uPA的蛋白质表达水平,而不影响其mRNA表达水平。转染了miR-193b的MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞株其体外运动,侵袭和增殖能力明显的降低。体内实验表明miR-193b也能够明显的抑制MDA-MB-231细胞在裸鼠体内的增殖能力和肺部形成转移灶的能力。在人乳腺癌临床组织标本中,和淋巴结转移阴性的组织相比,淋巴结转移阳性的组织中uPA的蛋白质表达水平明显的升高,miR-193b的表达水平明显的降低,但是两组组织uPA的mRNA表达水平没有明显的差异。生存结果分析显示,miR-193b的表达水平与病人的生存时间显著相关。结论:miR-193b能够抑制uPA的表达;在乳腺癌发生的过程中,miR-193b的表达水平下调是造成uPA的表达明显匕调的一个只要因素,从而加剧了乳腺癌的转移和侵袭。

全文目录

中文摘要  4-5
英文摘要  5-7
论文正文  7-57
  前言  7-11
  第一部分:筛选亚克隆细胞株和miRNA表达谱分析  11-17
    材料和方法  11-13
    结果  13-16
    讨论  16-17
  第二部分:鉴定miR-193b对uPA的调控作用  17-41
    材料和方法  17-33
    结果  33-40
    讨论  40-41
  第三部分:miR-193b对uPA调控的生物学意义  41-50
    材料和方法  41-43
    结果  43-49
    讨论  49-50
  第四部分:miR-193b在乳腺癌组织中的表达  50-57
    材料和方法  50-51
    结果  51-56
    讨论  56-57
总结  57-58
参考文献  58-63
拟发表的文章  63-64
致谢  64-65

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 乳腺肿瘤
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