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三唑类化合物对肿瘤细胞的作用研究

作　者: 孙婕
导　师: 瞿斌
学　校: 青岛科技大学
专　业: 应用化学
关键词: 肿瘤细胞凋亡线粒体膜电位氧自由基 ATP 谷胱甘肽
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

本实验选取三唑类化合物3-(1H-1,2,3-苯并三唑)-1-(4-氯苯基)-1-氧丙酮-2-2,4-二氯苯甲酸(Bz)对肝癌细胞株BEL-7402和小鼠乳腺癌细胞株4T-1进行实验,发现它对细胞的增殖抑制有良好的浓度和时间依赖性并且能够引起细胞DNA的片段化。通过进行自由基、线粒体膜电位、ATP酶检测实验,分别从细胞水平,细胞器水平方面对Bz诱导细胞凋亡的机理进行了研究。Bz可能通过触发线粒体膜电位、产生自由基的途径诱导癌细胞凋亡。此外,在乳腺癌细胞实验中,亚毒剂量的Bz与TZD具有显著的协同作用。其原因可能是:低剂量的Bz虽然不能导致明显的杀细胞作用,但是可迅速引起膜通透性和膜上许多酶活性改变,从而导致TZD杀伤细胞作用增强。实验中我们将Bz作用于乳腺癌4T-1细胞,在线粒体机能和氧自由基产生方面研究了谷胱甘肽的损耗对4T-1细胞的影响。利用抑制剂BSO阻止谷胱甘肽合成,通过检测线粒体膜电位和氧自由基的含量,得到结论:谷胱甘肽能够阻止Bz引起的线粒体氧化损伤。在谷胱甘肽缺损情况下,Bz通过线粒体损伤来诱导细胞凋亡,很可能是通过呼吸链产生的氧自由基增加来实现。实验结果表明Bz具有一定的抗癌潜力。

全文目录

摘要  3-4
ABSTRACT  4-9
第一章前言  9-23
  1.1 综述  9
  1.2 国内外抗肿瘤药物的研究  9-10
  1.3 肿瘤细胞凋亡的研究进展  10-19
    1.3.1 恶性肿瘤细胞的生物学特征  10-11
    1.3.2 正常细胞与恶性肿瘤细胞的区别  11-12
    1.3.3 细胞凋亡及其特征  12
    1.3.4 肿瘤与细胞凋亡的关系  12-13
    1.3.5 细胞凋亡在恶性肿瘤中的作用  13-14
    1.3.6 影响细胞凋亡的因素  14-16
    1.3.7 线粒体与细胞凋亡  16-17
    1.3.8 氧自由基与细胞凋亡  17-18
    1.3.9 谷胱甘肽的特点及生物学应用  18
    1.3.10 抗肿瘤药物的特性  18-19
  1.4 抗肿瘤药物的研究前景  19-20
  1.5 三唑类化合物的药物特性  20-23
    1.5.1 简介  20-21
    1.5.2 三唑类化合物的药物特性及抗肿瘤研究进展  21-22
    1.5.3 小结  22-23
第二章三唑类化合物抗肿瘤活性的研究  23-47
  第一节实验部分  23-30
    1.1 研究对象  23
    1.2 试剂  23-25
      1.2.1 试剂  23-24
      1.2.2 试剂的配制  24-25
    1.3 实验仪器  25-26
    1.4 实验原理与实验方法  26-30
      1.4.1 3-(1H-1,2,3-苯并三唑)-1-(4-氯苯基)-1-氧丙酮-2-2,4-二氯苯甲酸(Bz)的合成及溶液配制  26
      1.4.2 细胞的培养  26
      1.4.3 细胞生长抑制测定  26-27
      1.4.4 DNA片断化检测  27-28
      1.4.5 线粒体的提取  28
      1.4.6 线粒体膜电位的检测  28-29
      1.4.7 细胞内自由基的检测  29-30
      1.4.8 细胞内ATPase活性检测  30
  第二节实验结果  30-44
    2.1 化合物Bz结构表征数据  30-31
    2.2 化合物Bz作用于肝癌BEL-7402细胞  31-36
      2.2.1 化合物Bz对BEL-7402细胞活性测试  31-32
      2.2.2 细胞凋亡检测结果  32-33
      2.2.3 Bz对BEL-7402细胞线粒体膜电位的影响  33-34
      2.2.4 Bz对BEL-7402细胞内自由基含量的影响  34-36
      2.2.5 ATPase活性的变化  36
    2.3 化合物Bz作用于小鼠肝脏线粒体  36-37
    2.4 化合物Bz作用于乳腺癌4T-1细胞  37-42
      2.4.1 Bz对4T-1细胞生长的抑制作用  37-38
      2.4.2 Bz对4T-1细胞的影响  38
      2.4.3 Bz对4T-1细胞DNA的影响  38-39
      2.4.4 细胞线粒体膜电位的变化  39-41
      2.4.5 Bz对ATPase的影响  41-42
    2.5 化合物Bz与罗格列酮TZD联合作用于乳腺癌4T-1细胞  42-44
      2.5.1 单独使用Bz或TZD处理细胞  42-43
      2.5.2 低剂量的Bz和TZD联合用药  43-44
  第三节讨论  44-47
    3.1 Bz对肝癌细胞BEL-7402的作用  44-45
    3.2 Bz对乳腺癌细胞4T-1的作用  45-46
    3.3 Bz与TZD对乳腺癌细胞4T-1的联合作用  46
    3.4 小结  46-47
第三章谷胱甘肽抑制三唑类化合物Bz诱导肿瘤细胞凋亡  47-60
  第一节实验部分  47-50
    1.1 实验材料  47-48
      1.1.1 研究对象  47
      1.1.2 试剂  47-48
    1.2 实验原理和实验方法  48-50
      1.2.1 细胞培养  48
      1.2.2 氧自由基的检测  48-49
      1.2.3 谷胱甘肽含量的检测  49
      1.2.4 线粒体膜电位的检测  49
      1.2.5 细胞活性检测  49-50
      1.2.6 流式细胞计量分析和脂酰辅酶A活性测定  50
      1.2.7 caspase-3和caspase-9活性检测  50
  第二节实验结果  50-60
    2.1 Bz引起过氧化物酶体增加  50-51
    2.2 Bz引发氧自由基产生  51-52
    2.3 谷胱甘肽损耗使乳腺癌细胞对TZD的敏感性增强  52-55
    2.4 细胞活性的改变  55-56
    2.5 谷胱甘肽阻止线粒体膜电位崩溃  56-59
    2.6 caspase活性  59-60
  第三节讨论  60
结论  60-62
参考文献  62-71
附图  71-72
致谢  72-73
攻读学位期间发表的学术论文目录  73-74

三唑类化合物对肿瘤细胞的作用研究

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