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脂质体介导Survivin反义寡核苷酸增强阿霉素诱导肝癌细胞株HepG2凋亡的研究

作　者: 张社芹
导　师: 苗雄鹰
学　校: 中南大学
专　业: 普通外科学
关键词: 肝癌 脂质体 Survivin 反义寡核苷酸
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 18次
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内容摘要


目的：肝癌(hepatocelular carcinoma,HCC),是我国最常见的恶性肿瘤之一恶性程度高、预后差,严重威胁着人类生命与健康。目前,手术切除仍是治疗HCC首选和较有效的方法。化疗是HCC一项重要的辅助治疗手段,但对正常细胞的毒性和肿瘤细胞的耐药性是化疗面临的两大难题。研究表明,Survivin是迄今发现的最强的凋亡抑制因子,并具有抑制细胞凋亡和调节细胞周期双重功能,与肿瘤的化疗耐药性密切相关。本课题利用脂质体介导Survivin反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)研究其增强阿霉素(adriamycin,ADM)诱导肝癌细胞凋亡的作用。方法：通过脂质体转染Survivin ASODN进入肝癌细胞,运用RT-PCR和Western blot检测Survivin的变化,MTT比色法检测细胞的增殖抑制,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测肝癌细胞的凋亡率。用ADM处理后,MTT比色法检测细胞的增殖抑制,FCM检测细胞的凋亡指数的变化。结果：在转染了Survivin的ASODN 24小时后,ASODN Survivin各组均显示mRNA和蛋白的表达下调,以800ng/ml组最为明显,与对照组比较有显著性差异(P<0.05)；MTT发现Survivin ASODN处理后各组细胞增殖活性均有不同程度降低；FCM检测发现HepG2细胞在400ng/ml,600ng/ml,800ng/ml组的ASODN在作用24小时后凋亡率可分别为7.45±0.14%,13.15±0.37%,35.75±0.68%,与对照空白组0.54±0.05%和SODN转染组0.56±0.08%比较有显著性差异(P<0.05)。在加用ADM后,600ng/mlASODN组的细胞凋亡率可达41.35±0.68%,与单独使用ADM和转染ASODN后的凋亡率16.94±0.54%和15.07±0.35%比较有显著性差异。而MTT比色实验显示空白对照组与ADM组和ASODN组在转染细胞24小时后,细胞增殖抑制有明显的差异(P<0.05),而ADM+ASODN组与其余三组比较均有显著性差异(P<0.05)。结论：采用脂质体介导转染针对Survivin设计的ASODN,能封闭Survivin基因,下调Survivin蛋白及mRNA的表达,并促进HepG2细胞的凋亡及抑制肝癌细胞生长。ASODN封闭Survivin的表达能加强ADM诱导肝癌细胞凋亡,推测其可增加ADM化疗敏感性,改善常规化疗的效果,有潜在的临床应用价值。

全文目录


摘要  4-6
ABSTRACT  6-10
第一章 前言  10-11
第二章 Survivin反义寡核苷酸对HepG2肝癌细胞的生长抑制作用的研究  11-23
  2.1 材料与方法  11-17
    2.1.1 实验材料  11-12
    2.1.2 实验方法  12-16
    2.1.3 统计学处理  16-17
  2.2 结果  17-23
    2.2.1 Survivin ASODN转染HepG2细胞  17
    2.2.2 转染Survivin的反义寡核苷酸对Survivin mRNA的抑制作用  17-19
    2.2.3 ASODN转染后HepG2细胞中Survivin蛋白表达变化  19
    2.2.4 MTT检测细胞的增殖抑制  19-20
    2.2.5 运用流式细胞仪检测凋亡的结果  20-23
第三章 Survivin反义寡核苷酸增强阿霉素诱导肝癌细胞株HepG2凋亡的研究  23-28
  3.1 材料与方法  23-25
    3.1.1 实验材料  23
    3.1.2 实验方法  23-24
    3.1.3 统计学处理  24-25
  3.2 结果  25-28
    3.2.1 有无ADM处理的ASODN对HepG2细胞增殖的影响  25
    3.2.2 有无ADM处理的ASODN转染细胞后的凋亡  25-28
第四章 讨论  28-32
第五章 结论  32-33
参考文献  33-35
综述  35-48
  参考文献  43-48
致谢  48-49
在读期间发表的论文和科研成果  49

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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