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17-AAG对人胃癌细胞株BGC-823增殖和凋亡的影响及其机制研究

作　者: 韩雨
导　师: 张永健
学　校: 河北医科大学
专　业: 药理学
关键词: Hsp90 17-AAG 胃癌 BGC-823 生长抑制 周期 凋亡
分类号: R735.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要


胃癌是一种常见的消化系统的恶性肿瘤，严重威胁着人类的生命健康。寻找有效的胃癌治疗方法，提高胃癌患者的生存率和生活质量迫在眉睫。Hsp90是一种重要的热休克分子伴侣蛋白，可以调控和维持多种蛋白的构象和功能。因此，Hsp90抑制剂通过调控蛋白的表达来影响肿瘤的发生和发展。本实验选取人胃癌细胞株BGC-823作为研究对象，探讨Hsp90抑制剂17-AAG对人胃癌细胞增殖及凋亡的影响并了解其相关机制。第一部分17-AAG对人胃癌细胞株BGC-823增殖的影响目的：研究17-AAG对人胃癌细胞株BGC-823增殖的影响及其机制。方法：1以不同浓度的17-AAG作用于对数生长期的人胃癌细胞株BGC-823，在不同的作用时间点通过MTT比色法检测其光密度（OD值）；2采用MTT比色法测定活细胞数量，绘制经17-AAG作用后人胃癌细胞株BGC-823的生长曲线，观察药物对细胞生长的长期作用；3平板克隆实验检测17-AAG对单个细胞增殖能力的影响；4采用流式细胞分析术对1000nmol/L17-AAG作用48h后BGC-823的细胞周期进行分析；5Western Blot技术检测增殖相关蛋白的表达并分析17-AAG的作用机制。结果：1MTT法结果显示17-AAG抑制人胃癌细胞株BGC-823的增殖，且其抑制作用随着作用时间的延长而增强，浓度越高其抑制作用也越强。2生长曲线实验结果证实17-AAG有长期抑制人胃癌细胞株BGC-823生长的作用。3平板克隆形成实验结果发现人胃癌细胞株BGC-823培养11天后克隆形成率为57.29%，17-AAG100nmol/L和1000nmol/L药物处理组的克隆形成率分别下降至53.38%和8.08%，与空白对照组相比具有极显著性差异(P<0.01)。417-AAG1000nmol/L作用细胞48h后，G1期细胞数量明显减少，（P<0.05），S期细胞数量与对照组相比则增多，与对照组相比较差异具有统计学意义（P<0.05）。517-AAG可以上调蛋白CDK4的表达、下调蛋白PCNA的表达。而17-AAG对蛋白Akt1和MIF的表达均为抑制作用。结论：117-AAG对BGC-823细胞生长的抑制作用呈时间和浓度依赖性，且这种抑制作用持续时间长；217-AAG降低BGC-823细胞平板克隆形成能力；317-AAG可以干扰人胃癌细胞株BGC-823的细胞周期；417-AAG抑制细胞增殖与引起细胞周期阻滞有关，其干扰细胞周期进程可能与上调蛋白CDK4和下调蛋白PCNA的表达有关；517-AAG抑制细胞增殖还与下调MIF的表达，抑制Akt通路的激活有关。第二部分17-AAG对人胃癌细胞株BGC-823凋亡的影响目的：研究17-AAG对人胃癌细胞株BGC-823凋亡的影响及其相关机制。方法：1在光学显微镜下观察17-AAG对人胃癌细胞株BGC-823形态的影响；2采取DAPI染色的方法观察17-AAG诱导BGC-823细胞凋亡的现象；3Western Blot技术检测凋亡相关蛋白的表达并分析17-AAG的作用机制。结果：1经不同浓度的17-AAG作用48h后，人胃癌细胞株BGC-823部分脱壁漂浮于培养液中，贴壁细胞也出现变圆皱缩的现象。2DAPI染色法结果显示，随着药物浓度的增加，BGC-823细胞的凋亡程度逐渐增强。凋亡细胞出现细胞核固缩，染色质致密，蓝色荧光增强的现象，甚至出现凋亡小体。317-AAG诱导凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达减少，促凋亡蛋白Bax和p53的表达增多。随着药物浓度的升高的凋亡促进蛋白与凋亡抑制蛋白的比值（Bax/Bcl-2）逐渐增大。结论：117-AAG作用于BGC-823会使细胞形态发生改变。217-AAG可以诱导人胃癌细胞株BGC-823出现不同程度的凋亡。317-AAG可能通过上调促凋亡基因p53和Bax/Bcl-2的比值，激活线粒体通路，从而诱导细胞凋亡。

全文目录


摘要  4-7
ABSTRACT  7-10
英文缩写  10-11
引言  11-12
第一部分 17-AAG 对人胃癌细胞株 BGC-823 增殖的影响  12-36
  前言  12-13
  材料与方法  13-22
  结果  22-24
  附图  24-30
  讨论  30-32
  小结  32
  参考文献  32-36
第二部分 17-AAG 对人胃癌细胞株 BGC-823 凋亡的影响  36-47
  前言  36-37
  材料与方法  37-39
  结果  39-40
  附图  40-43
  讨论  43-44
  小结  44-45
  参考文献  45-47
结论  47-48
综述 热休克蛋白 90 及其抑制剂的研究进展  48-57
  参考文献  53-57
致谢  57-58
个人简历  58

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 胃肿瘤
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