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As₂O₃对食管癌EC-1细胞放疗增敏中PI3k、Akt、p-Akt、Bad、p-Bad的表达及意义

作　者: 张晖
导　师: 路平
学　校: 新乡医学院
专　业: 内科学
关键词: 食管癌EC-1细胞 As2O3 放疗增敏
分类号: R735.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

背景食管癌是常见的恶性肿瘤之一,放射治疗已成为中晚期食管癌主要的治疗手段之一。食管周围有重要的脏器如脊髓、肺和心脏等,靶区剂量不宜很高从而限制放疗的疗效。因此,放疗增敏成为必要的辅助措施。我们课题组前期研究显示：三氧化二砷(As2O3)对食管癌EC-1细胞有放疗增敏作用,但是机制尚不清楚。目的探讨As2O3对食管癌EC-1细胞放疗增敏的分子机制,为As203联合放疗治疗食管癌提供理论依据。方法1.实验分为四组：空白对照组(C)、单纯放疗组(R)、As2O3组、AS2O3+R组(Co-treat),即对食管癌EC-1细胞分别给予单纯放疗(2Gy)、As2O3(3μmol/L)、 As2O3(3μmol/L)+R (2Gy)处理。2.采用western blotting方法检测PI3K/Akt信号通路上的主要分子PI3k、Akt、 p-Akt、Bad、p-Bad的蛋白表达情况。结果1.与C组比较,R组、As2O3组、Co-Treat组p-Akt蛋白表达明显下调(0.41±0.01；0.37±0.01；0.27-0.04V.S0.49±0.05,P<0.01)；与R组、As2O3组比较,Co-Treat组的p-Akt蛋白表达明显下调(0.27±0.04V.S0.41±0.01；0.37±0.01,P<0.01),具有统计学意义。2.与C组比较,R组、As203组、Co-Treat组p-Bad蛋白表达明显下调(1.16±0.02；1.07±0.03；0.92±0.04V.S1.26±0.05,p<0.01),与R组比较、As2O3组比较,Co-Treat组p-Bad蛋白表达明显下调(0.92±04V.S1.16±0.02；1.07±0.03,P<0.01),具有统计学意义。3.与C组比较,R组、As2O3组、Co-Treat组PI3k蛋白表达无明显变化(3.47±0.31；3.47±0.26；3.41±0.18V.S3.51±0.22,P>0.05),与R组、As2O3组比较,Co-Treat组的PI3k蛋白表达无明显变化(3.41±0.18V.S3.47+±0.31；3.47±0.26,P>0.05),无统计学意义。4.与C组比较,R组、As2O3组、Co-Treat组Akt蛋白表达无明显变化(3.52±0.11；3.57±0.22；3.50±0.26V.S3.61±0.13,P>0.05),与R组、As2O3组比较,Co-Treat组的Akt蛋白表达无明显变化(3.50+0.26V.S3.52±0.11；3.57±0.22,P>0.05),无统计学意义。5.与C组比较,R组、As2O3组、Co-Treat组Bad蛋白表达无明显变化(1.81±0.03；1.79±0.03；1.80±0.06V.S1.82±0.08,P>0.05),与R组、As2O3组比较,Co-Treat组的Bad蛋白表达无明显变化(1.80±0.06V.S1.81±0.03；1.79±0.03,P>0.05)无统计学意义。结论三氧化二砷可能通过下调p-Akt、p-Bad蛋白表达,对食管癌EC-1细胞发挥放疗增敏作用,其机制可能是通过PI3K/Akt信号通路起作用。

全文目录

摘要  6-8
Abstract  8-11
前言  11-13
1 实验材料  13-18
  1.1 材料  13-18
    1.1.1 细胞系及培养条件  13
    1.1.2 主要实验仪器  13-14
    1.1.3 主要试剂  14-15
    1.1.4 培养基及常用试剂的制备  15-18
2 实验方法  18-23
  2.1 食管癌细胞的培养  18-19
    2.1.1 细胞复苏  18
    2.1.2 细胞消化和传代  18-19
    2.1.3 细胞冻存  19
  2.2 处理方法  19-20
  2.3 总蛋白的提取  20
  2.4 BCA法测定蛋白浓度  20-21
  2.5 Western blotting  21-23
    2.5.1 配胶  21
    2.5.2 电泳  21
    2.5.3 转膜  21-22
    2.5.4 封闭  22
    2.5.5 一抗孵育  22
    2.5.6 洗膜  22
    2.5.7 二抗孵育  22
    2.5.8 洗膜  22-23
    2.5.9 ECL化学发光  23
    2.5.10 显影定影  23
    2.5.11 数据处理  23
3. 统计学分析  23-24
4 结果  24-28
  4.1 食管癌EC-1细胞  24
  4.2 Westenr blotting 实验结果  24-28
    4.2.1 不同组组PI3K的蛋白表达  24
    4.2.2 不同组组AKT的蛋白表达  24-25
    4.2.3 不同组组p-Akt的蛋白表达  25
    4.2.4 不同组组Bad的蛋白表达  25-26
    4.2.5 不同组组p-Bad的蛋白表达  26-28
5 讨论  28-33
6 结论  33-34
附图  34-37
参考文献  37-43
综述  43-57
  参考文献  52-57
附录  57-58
攻读学位期间发表文章情况  58-59
致谢  59-60
个人简历  60

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