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MTA3、Snail1、E-cadherin在胆道闭锁病儿肝脏中表达及相关性分析

作　者: 方燕彬
导　师: 李索林；徐伟立
学　校: 河北医科大学
专　业: 外科学
关键词: 胆道闭锁 上皮-间质转化 转移相关基因3 Snail1 E-cadherin 免疫组织化学 逆转录-多聚酶链反应
分类号: R726.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要


目的：胆道闭锁（Biliary atresia, BA）是小儿最常见的一种胆道梗阻性疾病，其病因和发病机制尚不明确，主要包括遗传倾向、病毒感染、慢性炎症及自身免疫介导的胆道损害、胚胎发育畸型以及血管畸形等假说，其中病毒感染与免疫反应可能是导致病儿肝损害的关键所在。尽管临床上可以通过肝肠吻合术重建胆汁排泄途径，术后肝内胆管炎症和纤维化仍继续进展，最终导致大部分病儿胆汁淤积性肝硬化，超过半数胆道闭锁病儿最终需要肝移植，仅15%~20%的病儿靠自体肝存活至成年，这些病儿大部分仍存在慢性肝病、肝硬化。最近有研究发现胆道闭锁中硬化性胆管炎可能与上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）密切相关，而锌指转录因子Snail已被证实在EMT过程中起关键作用，Snail超家族中Snail1和Snail2两个成员，直接通过阻止E-钙粘附素（E-cadherin）的转录诱导EMT；而转移相关基因3（Metastasis-associated gene3, MTA3）却对Snail有抑制作用。本研究通过检测胆道闭锁病儿肝脏组织中MTA3、Snail1、E-cadherin的表达情况及其相关性，探讨三者在胆道闭锁的发生、发展中的作用及意义。方法：选取2012年2月～2013年9月间河北医科大学第二医院小儿外科收治的胆道闭锁21例的肝脏组织活检标本作为实验组，同期切取胆总管囊肿（congenital choledochal cyst, CCC）17例及肝破裂（normal liver,NL）10例的肝脏组织活检作为对照组。应用免疫组织化学（immunohistochemistry, IHC）法检测对比三组肝组织中MTA3、Snail1、E-cadherin蛋白的表达情况；应用逆转录-多聚酶链反应（reversetranscription-Polymerase Chain Reaction, RT-PCR）检测对比三组肝组织中MTA3、Snail1、E-cadherin基因mRNA水平表达情况。应用SPSS13.0统计软件对数据进行统计分析，以P＜0.05为差异有显著统计学意义，以P＜0.01为差异有非常显著统计学意义。结果：1MTA3的表达：MTA3蛋白在胆道闭锁、胆总管囊肿及正常肝组织中阳性表达率分别为28.57%、82.35%和90.00%，三组相比有显著性差异（P<0.01）；进一步两两比较，胆道闭锁组MTA3蛋白的表达低于胆总管囊肿组（P<0.01）与正常组（P<0.01），而胆总管囊肿组与正常组相比无显著性差异（P>0.05）。应用RT-PCR法检测三组中MTA3mRNA的表达情况，其相对表达量分别为0.10±0.05、0.25±0.10和0.23±0.11，三组相比有显著性差异（P<0.01）；进一步两两比较，胆道闭锁组MTA3mRNA的表达低于胆总管囊肿组（P<0.01）与正常组（P<0.01），而胆总管囊肿组与正常组相比无显著性差异（P>0.05）。2Snail1的表达：Snail1蛋白在胆道闭锁、胆总管囊肿及正常肝组织中阳性表达率分别为66.67%、23.53%和20.00%，三组相比有显著性差异（P<0.01）；进一步两两比较，胆道闭锁组Snail1蛋白的表达高于胆总管囊肿组（P<0.05）与正常组（P<0.05），而胆总管囊肿组与正常组相比无显著性差异（P>0.05）。应用RT-PCR法检测三组中Snail1mRNA的表达情况，其相对表达量分别为0.09±0.03、0.05±0.03和0.05±0.03，三组相比有显著性差异（P<0.01）；进一步两两比较，胆道闭锁组Snail1mRNA的表达高于胆总管囊肿组（P<0.01）与正常组（P<0.01），而胆总管囊肿组与正常组相比无显著性差异（P>0.05）。3E-cadherin的表达：E-cadherin蛋白在胆道闭锁、胆总管囊肿及正常肝组织中阳性表达率分别为33.33%、94.12%和90.00%，三组相比有显著性差异（P<0.01）；进一步两两比较，胆道闭锁组E-cadherin蛋白的表达低于胆总管囊肿组（P<0.01）与正常组（P<0.01），而胆总管囊肿组与正常组相比无显著性差异（P>0.05）。应用RT-PCR法检测三组中E-cadherin mRNA的表达情况，其相对表达量分别为0.32±0.16、0.69±0.22和0.75±0.23，三组相比有显著性差异（P<0.01）；进一步两两比较，胆道闭锁组E-cadherin mRNA的表达低于胆总管囊肿组（P<0.01）与正常组（P<0.01），而胆总管囊肿组与正常组相比无显著性差异（P>0.05）。4三种基因mRNA及蛋白表达相关性：在mRNA水平及蛋白水平，MTA3与Snail1均呈负相关（r=-0.862, P<0.01; r=-0.671, P<0.01）；Snail1与E-cadherin均呈负相关（r=-0.715, P<0.01; r=-0.571, P<0.01）；MTA3与E-cadherin均呈正相关（r=0.752, P<0.01; r=0.671, P<0.01）。结论：胆道闭锁中Snail1基因呈高表达，MTA3、E-cadherin均呈低表达，提示三者可能与胆道闭锁的发生密切相关；胆道闭锁中MTA3和E-cadherin的表达呈正相关，和Snail1的表达呈负相关，提示MTA3减少，可能会降低对Snail1的抑制，导致Snail1对E-cadherin的抑制加强，而减少E-cadherin表达，发生EMT，肝内外胆管上皮细胞极性及细胞间粘附被破坏，促进肝内外胆道炎症与纤维化进展，造成硬化性胆管炎，从而参与胆道闭锁的发生与发展。

全文目录


摘要  4-7
ABSTRACT  7-11
英文缩写  11-12
前言  12
材料与方法  12-19
结果  19-22
附图  22-30
附表  30-33
讨论  33-36
结论  36-37
参考文献  37-42
综述 先天性胆道闭锁的发病机制  42-58
  参考文献  49-58
致谢  58-59
个人简历  59

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中图分类: > 医药、卫生 > 儿科学 > 小儿外科学 > 小儿各生理系统外科学
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