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Mitofusin2在缺氧肺动脉高压肺动脉平滑肌细胞增殖过程中的作用

作　者: 张丹丹
导　师: 朱大岭
学　校: 哈尔滨医科大学
专　业: 药理学
关键词: Mfn2 缺氧 肺动脉血管平滑肌细胞 增殖 PI3K/AKT
分类号: R544.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


目的：线粒体融合蛋白2（mitofusin2，Mfn2）是线粒体融合蛋白家族的成员，是线粒体以保持形状，发挥必要的分子特征的重要分子。最近的研究发现，Mfn2还具有调节细胞增殖，分化，凋亡，信号转导等功能的作用，是参与各种心血管疾病的病理生理过程有关的细胞内信号转导分子。但它在缺氧性肺动脉高压中的作用还不清楚，我们通过免疫组化已发现慢性缺氧大鼠的肺动脉血管中线粒体融合蛋白表达明显增加。本课题旨在阐明线粒体蛋白2在缺氧性肺动脉中的作用及其调控机制。方法：1.利用免疫组化、Western Blot和PCR技术，验证慢性缺氧大鼠肺动脉血管及肺组织中Mfn2的表达水平，并检测其在各血管中表达的组织特异性。2.利用MTT、BrdU实验检测缺氧肺动脉平滑肌细胞，观察干扰Mfn2（SiMfn2）后的细胞增殖情况。3.利用流式细胞术来检测干扰掉Mfn2后细胞从G0/G1相进入G2/M+S相的情况，来确定增殖细胞中DNA的变化。4.利用Western Blot技术检测增殖相关蛋白PCNA、CyclinA在干扰掉Mfn2后的变化。5.利用MTT、BrdU、Western Blot和流式细胞术，观察Mfn2作用肺动脉血管平滑肌的增殖是否通过PI3K/AKT通路。结果：1.我们发现在缺氧状态下，Mfn2在肺组织和肺动脉平滑肌细胞中的表达量是增加的。2.增殖相关实验表明，缺氧肺动脉平滑肌细胞干扰掉Mfn2后，增殖水平下降。3.在SiMfn2和AKT抑制剂的同时作用下，增殖水平的下降和他们分别作用的下降的水平是一致的。结论：上述结果表明，Mfn2能介导缺氧肺动脉血管平滑肌细胞的增殖，并且这种作用是通过PI3K/AKT通路来完成的。

全文目录


中文摘要  6-7
Abstract  7-8
1、文献综述  8-15
  1.1 缺氧肺动脉高压  8-12
    1.1.1 缺氧肺血管收缩  9-10
    1.1.2 缺氧肺血管重构  10-12
  1.2 Mitofusin2  12-15
    1.2.1 Mfn2 简介  12-13
    1.2.2 Mfn2 与缺氧肺动脉高压  13
    1.2.3 展望  13-15
2、前言  15-16
3、材料与方法  16-26
  3.1 材料  16-19
    3.1.1 实验动物  16
    3.1.2 试剂  16-17
    3.1.3 实验仪器  17-18
    3.1.4  18-19
      3.1.4.1 上样缓冲液（1×）  18
      3.1.4.2 30%丙烯酰胺液  18
      3.1.4.3 丽春红  18
      3.1.4.4 转膜缓冲溶液（10×）  18
      3.1.4.5 电泳缓冲溶液（10×）  18
      3.1.4.6 TBS (10×)  18-19
      3.1.4.7 转移洗膜液  19
  3.2 方法  19-26
    3.2.1 慢性缺氧大鼠模型的建立  19
    3.2.2 细胞培养  19-20
    3.2.3 免疫组化  20-21
    3.2.4 Western Blot 方法检测蛋白表达  21-22
    3.2.5 MTT 实验  22
    3.2.6 RT-PCR 实验  22-24
    3.2.7 BrdU 实验  24
    3.2.8 SiRNA 设计和转染实验  24-25
    3.2.9 细胞周期与 DNA 分析实验  25
    3.2.10 统计学方法  25-26
4、结果  26-36
  4.1 缺氧大鼠肺组织中 Mfn2 的细胞分布  26-27
  4.2 Mfn2 在缺氧肺组织和细胞中蛋白和 mRNA 的表达  27-28
  4.3 Mfn2 在缺氧诱导的 PASMCs 增殖中的作用  28-29
  4.4 Mfn2 增殖细胞的细胞周期的影响  29-31
  4.5 Mfn2 对 AKT 通路的影响  31-33
  4.6 Mfn2 介导的增殖通过 AKT 通路  33-34
  4.7 SiMfn2 抑制细胞周期进程通过 AKT 通路  34-36
讨论  36-39
结论  39-40
致谢  40-41
参考文献  41-46
攻读硕士学位期间发表的与学位论文有关的代表性成果  46

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 心脏、血管（循环系）疾病 > 血压异常 > 高血压
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