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淫羊藿多糖对猪精液冷冻保存的影响

作　者: 李军伟
导　师: 芮荣
学　校: 南京农业大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 猪精液冷冻淫羊藿多糖活力
分类号: S828
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

猪冷冻精液有助于原种猪场的跨地区种质交流和遗传保护；冷冻精液可增加猪场输精的时间弹性,并有助于疫病防控。目前,猪精液冷冻方法或程序仍主要应用在需要进行品系转移或出口的情况,尚未广泛应用于猪的标准化生产中。猪冷冻精液应用的局限性主要受到冷冻程序成熟度的影响,现有的技术依然不够完善,效率偏低,窝仔数下降。近年来,在开发新型低毒冷冻保护剂(如DMF、DMA、MF等酰胺类物质)及尝试在稀释液中添加保护性物质(海藻糖、红景天多糖等糖类物质；褪黑素谷胱甘肽、维生素E和超氧化物歧化酶等抗氧化物质)方面的研究报道日益增多,改善猪精液冷冻后的精子质量仍是一项艰巨的任务；探索改善猪冻精质量的新方法具有重要的研究意义和应用价值。本研究在对公猪精液品质进行调查的基础上,尝试添加中药成分淫羊藿多糖以改进冷冻稀释液和解冻液,比较其在提高冻后猪精液质量上的效果,以期为进一步研究淫羊藿多糖对猪精液冷冻的作用、机理及应用奠定基础。本试验的主要研究内容如下。1.公猪新鲜精液品质调查及其与冻后质量的关系长白公猪射精量在250mL以上,活力总体较好,精液品质1-6月份最佳,7-8月份最差。大白公猪射精量为50-200mL,11-12月份精液质量相对稳定,4-10月份射精量变化幅度较大。杜洛克公猪射精量在100-400mL之间,变动范围150-300mL,精子活力7-9月份最差,10月至次年4月精子活力较好并较稳定。为了减少运输过程对精液质量的影响,采集精液后用等体积等温ZO-PVA液稀释,用玻璃瓶盛装并置于保温瓶中运输更有利于精液质量的保持。对精液样品质量及其冻后活力的分析表明,鲜精活力与冷冻解冻后精子活力呈极显著相关(r=0.5623,P<0.01)；鲜精密度与冻后精子活力相关性也显著(r=0.4316,P<0.05),冻前精液质量与冻后精子活力显著相关。2.猪精液的细管冷冻保存对冷冻解冻过程中影响猪冻精质量的各因素的研究结果表明,猪精液用等温等体积ZO-PVA液稀释后在室温、17℃或37℃下静置,对冻后效果无显著影响。当精子冻存密度达2×109/mL时,冻精解冻后活力最低；以1×109/mL和0.5×109/mL的密度冷冻猪精液,冻后活力差异不显著。1%甘油+2%DMF组合和1.5%甘油+1.5%DMF组合与3%甘油作为冷冻保护剂的冻后效果差异不显著,均可尝试用于猪精液冷冻保存,但仍需进一步的条件优化。37℃30s水浴解冻细管冻精后,分别孵育在37℃、30℃和室温的解冻液中,以及直接将细管置于室温下处理,冻后精子活力差异不显著。于2mL解冻液中每次解冻1支细管与解冻3支细管的效果无差异,但两者均较每次解冻6支细管的效果要好,三组解冻方式的冻后质膜完整性差异不显著。3.淫羊藿多糖对猪精子冷冻保存的保护作用在冷冻稀释液中添加4mg/mL淫羊藿多糖可以得到较好的冻后活力、质膜完整率和顶体完整率。在解冻液中添加2mg/mL淫羊藿多糖得到的冻后精子活力可达0.54,质膜完整率62.7%,顶体完整率53.0%。解冻后的不同保存温度对精子存活时间也有明显影响,室温环境似乎更有利于精子冻后的活力维持,解冻后4h精子活力仍可维持在0.40,6h后活力下降至0.30以下,这为冻精解冻后的应用提供了时间保证。

全文目录

摘要  7-9
ABSTRACT  9-12
简写及缩略语  12-13
第一部分文献综述  13-39
  第一章猪精液冷冻保存技术：进展及前景  13-39
    1. 猪精液冷冻保存研究简述  13-14
    2. 猪精子的生物学特征  14-16
    3. 猪精液冷冻保存原理  16
    4. 影响猪精液冷冻保存的因素  16-26
      4.1 猪精液的特殊性  17-18
      4.2 猪精液冷冻程序  18-23
      4.3 公猪品种和个体差异  23-24
      4.4 冷冻稀释液  24-25
      4.5 冷冻保护剂  25-26
    5. 猪精液冷冻保存研究进展  26-31
      5.1 糖类  26-27
      5.2 冷冻保护剂  27-29
      5.3 淫羊藿多糖在猪精液冷冻中的应用  29-31
    6. 精子质量的实验室检查  31-36
      6.1 人工直观法  31-32
      6.2 精子的自动化检查技术  32
      6.3 冷冻精子的评价  32-36
    7. 猪冷冻精液的应用前景  36-39
第二部分试验研究  39-73
  第二章猪精液品质调查与细管冷冻保存试验  39-63
    摘要  39-40
    1. 材料  40-43
      1.1 猪精液来源  40-41
      1.2 主要仪器设备及器械  41
      1.3 主要试剂  41-42
      1.4 试剂的配制  42-43
      1.5 卵黄的制备  43
    2. 方法  43-47
      2.1 猪精液冷冻程序  43-44
      2.2 猪冷冻精液解冻程序  44
      2.3 活力检测  44
      2.4 顶体完整性检测  44-45
      2.5 质膜完整性检测  45
      2.6 畸形率检查  45
      2.7 实验设计  45-46
      2.8 数据处理  46-47
    3. 结果  47-56
      3.1 猪新鲜精液质量变化规律  47-51
      3.2 猪新鲜精液质量与冻后精子活力的关系  51-52
      3.3 鲜精被稀释后不同静置温度的比较  52-53
      3.4 不同常温稀释液对冻后质量的影响  53
      3.5 不同冻存密度对冻后精子活力的影响  53-54
      3.6 不同冷冻保护剂对冻后精子质量的影响  54
      3.7 不同解冻液对冻后精子质量的影响  54-55
      3.8 不同解冻方法对冻后精子质量的影响  55
      3.9 不同细管数对冻后精子质量的影响  55-56
    4. 讨论  56-63
      4.1 公猪鲜精质量对冻后精子质量的影响  57-58
      4.2 冻前预处理的作用  58-59
      4.3 冻存密度  59-60
      4.4 冷冻保护剂  60-61
      4.5 解冻程序  61-63
  第三章淫羊藿多糖在猪精液冷冻保存上的应用研究  63-73
    摘要  63-64
    1. 材料  64-66
      1.1 猪精液来源  64
      1.2 主要仪器设备及器械  64
      1.3 主要试剂  64
      1.4 试剂的配制  64-65
      1.5 卵黄的制备  65-66
    2. 方法  66-67
      2.1 猪精液冷冻程序  66
      2.2 猪冷冻精液解冻程序  66
      2.3 活力检测  66-67
    2.4 顶体完整性检测  67-68
      2.5 质膜完整性检测  67
      2.6 畸形率检查  67
      2.7 实验设计  67-68
      2.8 数据处理  68
    3. 结果  68-70
      3.1 在冷冻稀释液中添加不同浓度的淫羊藿多糖对冻后精子质量的影响  68
      3.2 在解冻液中添加不同浓度的淫羊藿多糖对冻后精子质量的影响  68-69
      3.3 不同保存温度对精子存活时间的影响  69-70
    4. 讨论  70-73
参考文献  73-85
全文结论  85-87
图版及说明  87-89
致谢  89

淫羊藿多糖对猪精液冷冻保存的影响

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