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油菜蜂花粉酚类化合物的分离及其抗氧化活性研究

作　者: 杨佳林
导　师: 孙丽萍
学　校: 中国农业科学院
专　业: 食品科学
关键词: 油菜蜂花粉比色法酚类化合物分离生物活性
分类号: R151
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

蜂花粉是自然中存在的营养最丰富的的天然食品资源之一,我国油菜为我国大面积种植的农业经济作物,油菜蜂花粉源丰富,我国油菜蜂花粉的产量在300吨以上。蜂花粉营养丰富,含有大量的多糖、氨基酸、蛋白质、酚类化合物等物质,蜂花粉中酚类化合物已经成为目前研究重点之一,本文对蜂花粉中酚类化合物的测定进行了方法学研究,对酚类化合物分离柱材进行了选择,通过酸解确定了分离组分含有大量的黄酮苷类物质,并进行了体内、外抗氧化实验,为蜂花粉的功能活性研究提供了一定的参考。本实验对铁氰化钾法、Folin-phenol法、酒石酸亚铁法进行了方法学研究,通过精密度、稳定性、回收率、重复性和最大吸收波长等方法学的考察,建立了标准曲线,确定了Folin-phenol法是蜂花粉中酚类化合物含量测定的最佳方法,该法测得蜂花粉中酚类化合物的含量为2.274%。以酚类化合物含量、DPPH?抑制率和还原力为指标,考察了聚酰胺和D101大孔树脂对油菜蜂花粉中的酚类化合物分离效果。油菜蜂花粉正丁醇萃取物,经聚酰胺层析,80%和100%乙醇洗脱组分酚类化合物含量、DPPH?抑制率和还原力指标明显提高,表明聚酰胺适合分离油菜蜂花粉中极性较小的酚类化合物,而蜂花粉水溶性酚类化合物通过D101大孔树脂分离,其50%乙醇洗脱组分酚类化合物含量显著地高于其它组分,达到21.5%,且DPPH?和还原力活性较强,说明D101大孔树脂更适合蜂花粉中水溶性酚类化合物的分离。蜂花粉醇提取物通过盐酸酸解,经薄层色谱法和和高效液相法检测,生成了槲皮素和山奈酚,其DPPH自由基抑制率显著增强。薄层色谱法将样品中的黄酮苷元类物质分离,TLC-DPPH技术能对蜂花粉提取物及其酸解液中具有DPPH?清除力的物质进行直观分析,本文首次将TLC-DPPH法引入蜂花粉生物活性物质的分离和抗氧化活性研究,通过显色反应,筛选功能活性组分。以D101大孔树脂50%乙醇洗脱组分为原料,分别进行DPPH自由基清除实验和小鼠脂质过氧化模型试验,动物实验以血清中的MDA和T-AOC,肝匀浆中MDA、T-AOC和GSH为指标,结果表明,黄酮苷类物质DPPH半抑制浓度显著地低于山奈酚,说明黄酮苷类物质DPPH?抑制力低于黄酮苷元。同时,黄酮苷类化合物能够显著地降低小鼠肝匀浆MDA的生成,提高小鼠肝匀浆GSH含量,同时提高小鼠肝匀浆和血清中T-AOC,说明蜂花粉中黄酮苷类物质在体内具有较强的自由基清除率。以D101大孔树脂50%乙醇洗脱组分为原料,利用制备型高效液相色谱进行分离,得到了一种黄酮苷类物质,经过HPLC面积归一化处理,其纯度达到97.42%,质谱、核磁共振鉴定其结构是山奈酚3-O-(2”-O-β-D-吡喃葡萄糖苷基)-β-D-葡萄糖苷,在浓度为750μg/ml时,山奈酚3-O-(2”-O-β-D-吡喃葡萄糖苷基)-β-D-葡萄糖苷DPPH?抑制率为10.68%,说明黄酮苷类物质DPPH自由基清除率较低。油菜蜂花粉含有多种生物活性物质,各种生物活性物质功能活性差异较大,本文对油菜蜂花粉酚类化合物进行了分离、DPPH自由基清除力、还原力和脂质过氧化模型小鼠实验,其它功能活性物质有待进一步研究。

全文目录

摘要  6-7
Abstract  7-15
第一章引言  15-21
  1.1 蜂花粉概述  15
  1.2 蜂花粉酚类化合物研究  15-16
  1.3 油菜蜂花粉酚类化合物开发利用  16-19
    1.3.1 油菜蜂花粉提取研究进展  16-17
    1.3.2 酚类化合物的检测方法研究进展  17
    1.3.3 酚类化合物的抗氧化性研究  17-19
  1.4 论文的研究目的和意义  19-20
  1.5 本实验技术路线  20-21
第二章油菜蜂花粉酚类化合物的含量测定  21-27
  2.1 材料与方法  21-23
    2.1.1 实验材料  21-22
    2.1.2 样品制备  22
    2.1.3 最大吸收波长的选择  22
    2.1.4 标准曲线的建立  22
    2.1.5 稳定性试验  22-23
    2.1.6 精密度试验  23
    2.1.7 重现性试验  23
    2.1.8 回收率试验  23
  2.2 结果与分析  23-26
    2.2.1 最大吸收波长的选择  23
    2.2.2 标准曲线的建立  23-24
    2.2.3 稳定性试验  24-25
    2.2.4 精密度试验  25
    2.2.5 重现性试验  25-26
    2.2.6 加标回收试验  26
  2.3 小结  26-27
第三章油菜蜂花粉酚类化合物的初步分离和抗氧化性研究  27-35
  3.1 材料与方法  27-29
    3.1.1 材料与仪器  27
    3.1.2 蜂花粉中酚类化合物的分离  27-28
    3.1.3 DPPH·清除率试验  28
    3.1.4 还原力的测定  28
    3.1.5 蜂花粉中酚类化合物含量的测定  28-29
    3.1.6 统计分析  29
  3.2 结果与分析  29-33
    3.2.1 油菜蜂花粉分级提取及分离  29
    3.2.2 分离组分对DPPH·清除率  29-30
    3.2.3 分离组分还原力测定  30-31
    3.2.4 酚类化合物含量测定  31-33
    3.2.5 酚类化合物含量、还原力和DPPH 清除率相关性  33
  3.3 小结  33-35
第四章油菜蜂花粉中黄酮醇及其抗氧化性研究  35-41
  4.1 实验材料与方法  35-36
    4.1.1 仪器、试剂及材料  35
    4.1.2 样品制备  35-36
    4.1.3 TLC-DPPH 方法  36
    4.1.4 DPPH·清除试验  36
    4.1.5 蜂花粉黄酮醇含量测定  36
    4.1.6 统计分析  36
  4.2 结果与分析  36-40
    4.2.1 TLC-DPPH 分析  36-37
    4.2.2 DPPH·清除率实验分析  37-38
    4.2.3 黄酮醇含量测定分析  38-40
  4.3 小结  40-41
第五章油菜蜂花粉中黄酮苷类分离及其抗氧化性研究  41-48
  5.1 实验材料与方法  41-42
    5.1.1 仪器、试剂及材料  41
    5.1.2 蜂花粉黄酮苷类物质分离及HPLC 分析  41
    5.1.3 DPPH·清除试验  41-42
    5.1.4 小鼠脂质过氧化模型建立  42
    5.1.5 生化指标的测定  42
  5.2 结果与分析  42-46
    5.2.1 分离组分HPLC 分析  42-43
    5.2.2 DPPH·清除试验分析  43
    5.2.3 各生化指标的测定分析  43-46
  5.3 小结  46-48
第六章油菜蜂花粉黄酮苷类物质的纯化及鉴定  48-54
  6.1 材料与方法  48-49
    6.1.1 试剂与材料  48
    6.1.2 方法  48-49
  6.2 结果与分析  49-53
    6.2.1 50%乙醇洗脱组分制备分离  49
    6.2.2 纯度鉴定  49-50
    6.2.3 结构鉴定  50-52
    6.2.4 山奈酚3-O-(2”-O-β-D-吡喃葡萄糖苷基)-β-D-葡萄糖苷的含量测定  52-53
    6.2.5 蜂花粉中山奈酚3-O-(2”-O-β-D-吡喃葡萄糖苷基)-β-D-葡萄糖苷DPPH·清除率  53
  6.3 小结  53-54
结论  54-56
参考文献  56-60
致谢  60-61
作者简历  61

油菜蜂花粉酚类化合物的分离及其抗氧化活性研究

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