学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示
玫瑰MYB基因的克隆及超量表达载体的构建
作 者: 秦宏道
导 师: 包满珠
学 校: 华中农业大学
专 业: 园林植物与观赏园艺
关键词: MYB 转录因子 玫瑰(Rosa rugosa Thunb.) 基因克隆
分类号: S685.12
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 96次
引 用: 0次
阅 读: 论文下载
内容摘要
玫瑰(Rosa rugosa Thunb.)是蔷薇科蔷薇属的一种重要的观赏植物,花型秀美,芳香四溢,色彩绚丽。因其特有的芳香、花色及抗寒性、抗旱性,在环境条件日益恶化的今天,在园林应用中有着巨大的发展潜力。从玫瑰花瓣中提取的精油,是世界名贵的精油之一,素有“液体黄金”之称。然而,一直以来人们对玫瑰的研究还只是局限在栽培管理上,随着分子生物学和生物技术的迅猛发展,利用生物技术手段来改良植物性状也成为了可能。近年来,利用MYB类转录因子对观赏植物进行性状改良如花色、花香的研究,逐渐成为研究的热点。本研究采集玫瑰花瓣混合样进行转录组测序,并提取了高质量的花瓣混合样总RNA,反转录合成cDNA。从转录组测序结果中筛选出13个MYB基因的EST序列,以此设计引物,从玫瑰基因组DNA中扩增出每个MYB基因的gDNA片段。然后,采用TAIL-PCR技术对gDNA片段两侧的未知序列进行扩增,直至扩增出两端的UTR区。最后,在MYB基因两端的UTR区设计上下游引物,扩增玫瑰MYB基因的gDNA全长和cDNA全长。本研究挑选了6个MYB基因的全长分别构建超量表达载体,计划在后续的实验中转化野生烟草,研究其功能。本研究的主要结果如下:1.从转录组测序结果中,筛选出13个MYB基因,采用普通PCR和TAIL-PCR技术相结合的方法,扩增出全长。其中属于R1/R2类型的MYB基因有RrMYB8和RrMYB10,属于R2R3-MYB的有RrMYB1、RrMYB2、RrMYB3、RrMYB5、RrMYB6、RrMYB7、RrMYB9、RrMYB11、RrMYB12和RrMYB13,属于R1R2R3类型的MYB基因有RrMYB4。经过对NCBI上已报道的MYB基因进行蛋白质的氨基酸序列比对,发现扩增出的MYB基因中都包含DNA结合结构域等MYB基因的结构特点,初步认定所扩增出的基因均为MYB基因。2.本文构建了六个超量表达载体。选取R1/R2类型的RrMYB8基因的cDNA构建了pCAMBIA2300s-RrMYB8载体;选取R2R3类型的RrMYB1基因的cDNA、RrMYB2基因的gDNA、RrMYB5基因的gDNA、RrMYB6基因的cDNA和RrMYB7基因的cDNA,分别构建了PMV-RrMYB1载体、pCAMBIA2300s-RrMYB2载体、PMV-RrMYB5载体、PMV-RrMYB6载体和PMV-RrMYB7载体,并且把重组质粒电转化农杆菌EHA105保存。
|
全文目录
摘要 6-8 Abstract 8-10 缩略词表 10-11 第一章 绪论 11-19 1.1 玫瑰简介 11 1.2 转录因子概述 11-12 1.3 MYB类转录因子的结构特征与分类 12-14 1.4 MYB类转录因子的功能及研究进展 14-18 1.4.1 调节植物次生代谢 14-16 1.4.2 调节植物细胞形态和模式建成 16-17 1.4.3 参与植物对环境胁迫的应答 17 1.4.4 参与植物对激素的应答 17-18 1.5 研究目的及意义 18-19 第二章 玫瑰MYB基因的克隆与分析 19-38 2.1 前言 19 2.2 材料 19-21 2.2.1 植物材料 19-20 2.2.2 实验试剂 20 2.2.3 载体和菌株 20 2.2.4 实验仪器 20-21 2.3 实验方法 21-28 2.3.1 玫瑰花瓣转录组测序 21 2.3.2 玫瑰花瓣高质量RNA的提取及纯化 21-22 2.3.3 玫瑰花瓣RNA反转录 22-23 2.3.4 玫瑰基因组DNA的提取 23-24 2.3.5 玫瑰MYB基因gDNA片段的扩增 24-26 2.3.6 用TAIL-PCR扩增gDNA片段两端的未知序列 26-28 2.3.7 玫瑰MYB基因gDNA全长和cDNA全长的扩增 28 2.4 结果与分析 28-35 2.4.1 玫瑰花瓣总RNA的检测 28-29 2.4.2 TAIL-PCR产物检测 29-30 2.4.3 玫瑰MYB基因序列分析 30-31 2.4.4 玫瑰MYB基因功能预测 31-35 2.5 讨论 35-38 2.5.1 玫瑰花瓣总RNA的提取 35 2.5.2 关于TAIL-PCR 35-36 2.5.3 植物MYB基因的进化 36-38 第三章 玫瑰MYB基因超量表达载体的构建 38-51 3.1 前言 38 3.2 材料 38-40 3.2.1 菌株、质粒、酶、试剂 38 3.2.2 主要实验试剂的配置 38-39 3.2.3 实验仪器 39-40 3.2.4 实验所用引物序列 40 3.3 实验方法 40-45 3.3.1 目的基因插入片段的获得 40-41 3.3.2 摇菌 41 3.3.3 质粒DNA的提取 41-42 3.3.4 酶切及产物回收 42-43 3.3.5 目的片段与表达载体的连接 43 3.3.6 连接产物转化大肠杆菌 43 3.3.7 重组质粒的筛选及鉴定 43 3.3.8 重组质粒酶切验证 43-44 3.3.9 重组质粒导入根癌农杆菌EHA105及筛选鉴定 44-45 3.4 结果与分析 45-49 3.4.1 玫瑰MYB基因超量表达载体的构建 45-48 3.4.2 重组质粒转化农杆菌 48-49 3.5 讨论 49-51 第四章 前景展望 51-52 参考文献 52-60 附录 60-69 致谢 69
|
相似论文
- 多转录因子组合调控研究,Q78
- 红肉脐橙和‘国庆四号’温州蜜柑中CHS和CHI基因的克隆与表达及其对类黄酮积累的调控机制,S666.4
- 经典Wnt信号关键基因在人早期牙齿发育中的表达检测,R78
- 军曹鱼生长激素基因(GH)的克隆和表达,Q786
- Pseudomonas sp.RT-1低温脂肪酶发酵条件优化、纯化及基因的克隆表达,TQ925
- 红笛鲷清道夫受体B型Ⅰ类和抗冻蛋白Ⅱ型基因的克隆、表达与定量分析,S917.4
- 棉铃虫NADPH-细胞色素P450还原酶基因的克隆、时空表达及RNA干扰,S435.622.3
- 硅、硫对水稻砷吸收、积累的影响机制研究,S511
- 多菌灵降解菌的分离鉴定、生物学特性及多菌灵水解酶基因的克隆和表达研究,X172
- 烟草中NAC类转录因子基因的克隆与分析,Q943.2
- 鹰嘴豆热激转录因子CarHSFB2的克隆与功能验证,Q943.2
- 转录因子在棉纤维起始期的表达特征及三个转录因子基因的克隆与功能初步分析,Q943
- 氰氟草酯降解菌分离鉴定、降解特性的研究及氰氟草酯水解酶基因(chbH)的克隆和表达,X172
- 腐生葡萄球菌M36耐有机溶剂脂肪酶基因的克隆与表达,Q78
- 红曲霉洛伐他汀生物合成相关基因克隆与分析,TQ927
- α-半乳糖苷酶高产菌株的筛选及其基因的克隆、表达、纯化和性质研究,TQ925
- 荧光假单胞菌7-14生物膜突变株的筛选及tatC基因的克隆与功能初析,S432.4
- 烟夜蛾气味受体基因和精氨酸激酶基因的克隆与表达分析,S433.4
- 新疆小麦1Dx5基因的分离克隆及表达载体构建,S512.1
- 小麦苗期磷胁迫诱导紫色酸性磷酸酶基因和转录因子基因cDNA片段的克隆与分析,S512.1
- 野生种马铃薯蛋白酶抑制剂基因CYS和API的克隆及SpCYS转化马铃薯和烟草的初步研究,S532
中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 观赏园艺(花卉和观赏树木) > 观花树木类 > 蔷薇、玫瑰、月季
© 2012 www.xueweilunwen.com
|