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湛江港网箱养殖海区水质因子与细菌数量的关系及弧菌属细菌的分布

作　者: 邝英朋
导　师: 吴灶和
学　校: 广东海洋大学
专　业: 水产养殖
关键词: 异养细菌弧菌水质因子 BOX-PCR 16S rDNA 湛江港
分类号: S917.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

2009年12月~2010年11月对湛江港网箱养殖海域的三个不同采水样点(南油、麻斜、特呈)的表层海水进行采样,分析调查了该养殖海域中与养殖密切相关的九大水质因子(水温、盐度、pH、溶解氧、COD、叶绿素a、氨氮、活性磷、亚硝酸盐)的月变化动态、异养细菌的数量、弧菌数量以及弧菌属细菌的多样性分布。分析了水质因子与异养细菌及弧菌数量的相关性,并用细菌指标对该海域水质质量进行了初步评估。水质因子的监测及弧菌的多样性调查,对于港湾养殖水质环境的监控、鱼病暴发的预警具有重要的意义。研究的相关内容及主要结果如下:1.水质因子与细菌数量的相关性研究水温平均值为24.9℃,盐度平均值为26.2‰,pH平均值为7.87,溶解氧平均值为6.08mg/L,COD平均值为1.06mg/L,叶绿素a平均值为7.65μg/L,氨氮平均值为0.138mg/L,活性磷平均值为0.079mg/L,亚硝酸盐平均值为0.050mg/L。网箱养殖区和参照海区异养细菌全年的平均数量值分别为:1.88×10~4cfu/mL和1.16×10~4cfu/mL;网箱养殖区和参照海区弧菌全年的平均数量值分别为:7.54×10~2cfu/mL和3.85×10~2cfu/mL。海水中无论是异养细菌数量还是弧菌数量,都与温度、COD、叶绿素a、氨氮、亚硝酸盐为显著正相关(P<0.05),与盐度为显著负相关(P<0.05),与pH、溶解氧、活性磷的相关性较小或没有相关性。同一站点不同季节间异养细菌的数量比较结果为:夏、秋季节异养细菌数量普遍较高,春季次之,冬季最少。同一站点不同季节间弧菌的数量比较结果为:营养盐丰富、水温较高、水体污染严重的夏、秋季弧菌数量最高,春季、冬季则数量最少。弧菌的季节变动规律与异养细菌的基本一致。2.弧菌分布的多样性利用BOX-PCR与16S rDNA相结合的手段,将分离到的448株弧菌属细菌分至27个种,湛江港海区主要有4种弧菌,分别为:哈氏弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌。其中以哈氏弧菌出现的频率最多。其他多数种类弧菌只在个别月份零星出现。

全文目录

摘要  6-7
Abstract  7-11
1 前言  11-27
  1.1 湛江港简介  11-13
    1.1.1 地理位置  11
    1.1.2 自然生态条件  11
    1.1.3 增养殖资源  11-12
    1.1.4 海水网箱养殖情况  12-13
  1.2 海洋细菌简介  13-16
    1.2.1 海洋细菌定义  13
    1.2.2 国内外研究现状  13-14
    1.2.3 海洋异养细菌数量调查方法  14-16
    1.2.4 海洋异养细菌数量在海洋环境监测中的指示作用  16
  1.3 我国海洋弧菌的研究现状  16-27
    1.3.1 弧菌属的特征  16-18
    1.3.2 海洋弧菌的分布  18
    1.3.3 海洋弧菌病的研究  18-19
    1.3.4 弧菌的传统分类法  19-21
    1.3.5 弧菌的血清学技术  21-22
    1.3.6 弧菌的分子生物学鉴定技术  22-26
    1.3.7 弧菌的自动化鉴定技术  26-27
2 湛江港养殖海区水质因子周年变化及其与异养细菌和弧菌的数量动态关系  27-58
  2.1 材料与方法  27-30
    2.1.1 实验材料  27-28
    2.1.2 实验方法  28-30
  2.2 结果与分析  30-50
    2.2.1 湛江港海区水温、盐度、pH、溶解氧的周年变化  30-34
    2.2.2 湛江港海区化学需氧量、叶绿素a 的周年变化  34-36
    2.2.3 湛江港海区氨氮、活性磷、亚硝酸盐的周年变化  36-39
    2.2.4 湛江港各站点细菌的周年分布  39-40
    2.2.5 湛江港各站点不同季节的细菌数量分布  40-41
    2.2.6 各站点弧菌数量与异养细菌数量的比值  41-42
    2.2.7 细菌与水质因子的相关性  42-43
    2.2.8 弧菌数量与各水质因子的回归分析  43-47
    2.2.9 异养细菌数量与各水质因子的回归分析  47-50
  2.3 讨论  50-58
    2.3.1 水质因子的周年变化讨论  50-52
    2.3.2 细菌数量的周年数量变化讨论  52-55
    2.3.3 细菌数量与各项水质因子的相关性分析讨论  55-56
    2.3.4 异养细菌数量和弧菌数量的相关性讨论  56
    2.3.5 海洋异养细菌数量在海洋环境监测中的指示作用讨论  56-58
3 湛江港养殖海区弧菌种类的分布研究  58-69
  3.1 实验材料  58
    3.1.1 主要试剂  58
    3.1.2 PCR 引物  58
  3.2 实验方法  58-61
    3.2.1 弧菌的分离纯化、保存与基因组 DNA 的制备  58-59
    3.2.2 16S rDNA 序列扩增鉴定弧菌属菌株  59
    3.2.3 BOX-PCR 反应及带型分析  59-60
    3.2.4 16S rDNA 序列扩增与克隆测序  60-61
  3.3 结果与分析  61-67
    3.3.1 16S rDNA 序列扩增鉴定弧菌属菌株的结果  61-62
    3.3.2 BOX-PCR 反应及带型分析的结果  62
    3.3.3 16S rDNA 序列扩增与测定的结果  62-63
    3.3.4 湛江港海区弧菌属细菌的分布  63-67
  3.4 讨论  67-69
4 结论  69-70
参考文献  70-79
致谢  79-80
作者简介  80-81
导师简介  81

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