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谷氨酰胺对体外培养Müller细胞热休克蛋白70表达的影响

作　者: 韩真
导　师: 王大博
学　校: 青岛大学
专　业: 眼科学
关键词: 谷氨酰胺热休克蛋白70 Muller细胞
分类号: R774
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：探讨谷氨酰胺(L-glutamine)对体外培养的大鼠视网膜Mulller细胞热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。方法：取出生5-7天大鼠视网膜,胰酶消化制成单细胞悬液,建立稳定的Muller细胞体外培养体系,并用免疫细胞化学法对培养细胞进行鉴定。将体外培养的第4-6代大鼠视网膜Muller细胞随机分为正常对照组、硫酸锌处理组、谷氨酰胺处理组。谷氨酰胺处理组在培养液中分别加入终浓度为8、12、15、20mmol/L的谷氨酰胺。培养6h后,用免疫细胞化学法检测各组细胞内HSP70蛋白的表达,实时定量RT-RCR法检测各组细胞内HSP70mRNA的表达。结果：成功建立稳定的Muller细胞体外培养体系,95%以上细胞谷氨酰胺合成酶(GS)染色阳性。免疫细胞化学结果显示,正常对照组细胞即有HSP70的少量表达,各浓度谷氨酰胺处理组细胞HSP70的表达量均较正常对照组增加(P<0.05),并且具有浓度依赖性,最大程度的表达出现在谷氨酰胺15mmol/L组。实时定量RT-RCR结果显示,在正常对照组即有HSP70mRNA的少量表达,各浓度谷氨酰胺处理组HSP70mRNA水平较正常对照组上调(P<0.05),且具有浓度依赖性,最大程度的表达同样出现在谷氨酰胺15mmol/L组。结论：正常情况下,体外培养的大鼠视网膜Muller细胞少量表达HSP70。谷氨酰胺能够诱导体外培养的大鼠视网膜Muller细胞高效表达HSP70,并且具有浓度依赖性。

全文目录

摘要  2-3
Abstract  3-5
引言  5-7
第一章实验材料  7-9
  1.1 实验动物  7
  1.2 主要试剂  7
  1.3 主要仪器  7-9
第二章实验方法  9-16
  2.1 视网膜Muller细胞的培养和观察  9-10
  2.2 视网膜Muller细胞的鉴定  10
  2.3 实验分组和HSP70的诱导  10-11
  2.4 免疫细胞化学法检测HSP70蛋白的表达  11-12
  2.5 实时定量RT-PCR法检测HSP70 mRNA的表达  12-15
  2.6 统计学分析  15-16
第三章实验结果  16-19
  3.1 视网膜Muller细胞形态学观察  16
  3.2 视网膜MUller细胞鉴定结果  16
  3.3 免疫细胞化学结果  16-17
  3.4 实时定量RT-PCR结果  17-19
第四章讨论  19-22
结论  22-23
参考文献  23-27
附图  27-32
文献综述  32-44
  参考文献  38-44
攻读学位期间的研究成果  44-45
致谢  45-46

谷氨酰胺对体外培养Müller细胞热休克蛋白70表达的影响

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