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腺病毒介导的HSP70对脑缺血缺氧大鼠保护作用的研究

作　者: 郇姗姗
导　师: 曲彦
学　校: 青岛大学
专　业: 护理学
关键词: 热休克蛋白70(HSP70) 腺病毒 缺血缺氧
分类号: R743
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的初步探讨外源性HSP70表达对脑缺血缺氧大鼠脑组织的保护作用。方法①采用重组腺病毒vAd-HSP70感染293细胞,倒置荧光显微镜观察感染成功后收集病毒。②小鼠尾静脉注射携带全长HSP70基因的vAd-HSP70,采用RT-PCR方法检测注射24h、48h、72h后脑组织HSP70 mRNA的转录水平。③大鼠随机分为缺血缺氧(HI,n=25)组、vAd-HSP70静脉注射转染缺血缺氧组(vAd-HSP70, n=25)和正常对照(NC,n=25)组,采用RT-PCR和免疫组化技术对各组2、24、48、72h及7d脑组织中HSP70 mRNA及蛋白表达进行检测。同时病理切片染色观察各组脑组织形态学变化。结果①重组腺病毒vAd-HSP70可有效感染293细胞,成功收集病毒。②小鼠尾静脉注射含HSP70重组腺病毒后可检测到HSP70基因的有效表达,且在注射48h后表达水平最高(0.81181±0.23416),与24h、72h组比较有统计学意义(P< 0.05)。③RT-PCR显示缺血缺氧2h后大鼠脑内HSP70基因开始表达(0.7762±0.4855),在HI后24h达高峰(1.8087±0.4142),并在24-48h内维持较高水平,72h后逐渐下降(0.9700±0.0391),至7d(0.3458±0.0904)仍高于正常对照组。vAd-HSP70组HSP70各时间点的的表达水平均高于HI组,在2、48、72h差异有显著意义(P<0.05)。④免疫组化显示正常对照组未观察到典型HSP70阳性细胞,缺血缺氧后HSP70阳性细胞数明显增加,HI后2h即可见少量的HSP70阳性细胞,HI后24-48h达高峰,72h后开始减少,7d明显下降,但仍高于正常对照组。vAd-HSP70组各时间点HSP70阳性细胞的表达均高于HI组,在2h、48h、72h差异有显著意义,以48h组最为明显。病理学检测显示正常对照组光镜下脑组织结构正常,神经元形态正常,胞浆、胞核清晰,细胞排列有序。HI组2h后开始出现局限性神经元肿胀,24h部分神经细胞肿胀,体积增大,间质轻度水肿,48h间质水肿现象加剧,72h损害现象进一步加重,细胞明显水肿,脑微血管扩张、淤血。vAd-HSP70组缺血改变及细胞肿胀均较HI组减轻。结论①外源性HSP70可在大鼠脑组织有效表达②外源性HSP70可减轻大鼠脑缺血缺氧后病理损伤,对大鼠缺血缺氧性脑损伤具有保护作用。

全文目录


中文摘要  2-3
Abstract  3-7
引言  7-8
第一章 材料与方法  8-16
  1.1 仪器、试剂和耗材  8-10
    1.1.1 主要仪器和设备  8
    1.1.2 试剂和耗材  8-9
    1.1.3 主要试剂配置  9-10
  1.2 外源性热休克蛋白的检测  10-12
    1.2.1 重组腺病毒感染293细胞  10
    1.2.2 小鼠脑组织外源性HSP70表达的检测  10-12
  1.3 脑缺血缺氧大鼠模型的建立  12-13
    1.3.1 实验动物  12
    1.3.2 动物分组与处理  12
    1.3.3 大鼠尾静脉注射  12
    1.3.4 制备脑缺血缺氧大鼠模型  12-13
  1.4 标本的处理  13-15
    1.4.1 标本的取材  13
    1.4.2 标本分组  13
    1.4.3 制作HE染色石蜡切片  13-14
    1.4.4 HSP70的免疫组织化学染色  14-15
    1.4.5 RT-PCR检测大鼠脑组织HSP70 mRNA的转录表达  15
  1.5 统计学分析  15-16
第二章 结果  16-21
  2.1 重组腺病毒感染293细胞  16
  2.2 RT-PCR检测小鼠脑组织外源性HSP70的转录表达  16-17
  2.3 RT-PCR检测大鼠HSP70基因表达  17-19
  2.4 免疫组化检测HSP70的表达  19-20
  2.5 HE染色病理切片观察  20-21
第三章 讨论  21-26
  3.1 热休克蛋白的概述  21-22
  3.2 腺病毒载体的选择  22-23
  3.3 腺病毒介导的HSP70对缺血缺氧大鼠的保护作用  23-26
结论  26-27
参考文献  27-30
综述  30-41
  参考文献  38-41
攻读学位期间的研究成果  41-42
致谢  42-43

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中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学 > 神经病学 > 脑血管疾病
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