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阻遏miR-155表达对胰腺癌SW-1990细胞株增殖和凋亡影响的实验研究

作　者: 余亮
导　师: 李德春
学　校: 苏州大学
专　业: 普通外科学
关键词: miR-155 SW-1990 胰腺癌凋亡
分类号: R735.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的运用茎环引物的SYBR-GREE I实时荧光定量PCR检测miR-155在四种胰腺癌细胞株PANC-1、SW-1990、BxPc3、Patu8988中的表达情况，筛选出其中miR-155表达相对较高的一株胰腺癌细胞，通过转染miR-155-inhibitor阻遏miR-155表达相对较高的胰腺癌细胞株中miR-155的表达，然后检测分析阻遏miR-155的表达及预测靶蛋白TP53INP1的表达情况对该株细胞的增殖和凋亡的影响，为胰腺癌的基因治疗提供一定的实验和理论基础。方法①运用茎环引物的SYBR-GREE I实时荧光定量PCR检测miR-155在四种胰腺癌细胞株PANC-1、SW-1990、BxPc3、Patu8988中的表达情况，筛选出其中miR-155表达相对较高的一株胰腺癌细胞。②将Lipofectamine2000与FAM标记的阴性对照链(FAM-NC-inhibitor)按照几个不同比例混合后分组转染SW-1990细胞。流式细胞仪检测不同混合比转染相应的转染效率，然后选出最佳转染条件。③通过茎环引物的SYBR-GREE I实时荧光定量PCR(qPCR)和Westernblot技术检测has-miR-155-inhibitor对SW-1990细胞的miR-155表达的抑制情况及预测靶蛋白TP53INP1的表达情况。④通过CCK-8法检测转染后不同时间点各实验组细胞的活力，然后绘制各实验组的生长曲线。运用流式细胞仪检测各实验组细胞于转染后48h的凋亡情况及细胞周期，然后进行比较分析。结果①四种胰腺癌细胞株PANC-1、SW-1990、BxPc3、Patu8988中，SW-1990中miR-155的表达相对较高。②Lipofectamine2000与FAM-NC-inhibitor比例为5ul:5ul时，达最佳转染效率为98.6%。③miR-155-inhibitor阻遏组SW-1990细胞的miR-155的表达明显下调（P<0.05）、其预测靶蛋白TP53NP1明显上调（P<0.05）。④与空白对照组和阴性对照组（NC-inhibitor组）相比，miR-155-inhibitor阻遏组SW-1990细胞的增殖速度明显放缓；转染后48h流式细胞仪检测各实验组细胞凋亡率结果显示，miR-155-inhibitor阻遏组、空白对照组和NC-inhibitor组的凋亡率依次为15.7±0.52，2.47±0.45，3.17±0.35，miR-155-inhibitor阻遏组凋亡率明显高于另外两组，差别有统计学意义（P<0.05）。细胞周期检测miR-155-inhibitor组细胞大部分滞留在G0/G1期。结论脂质体介导的miR-155-inhibitor转染胰腺癌细胞株SW-1990能够明显下调miR-155的表达。下调该基因表达后，其预测靶蛋白TP53INP1表达上调，且SW-1990细胞增殖活力明显下降，凋亡显著增加，细胞周期被阻滞在G0/G1期。可见靶向阻遏miR-155在胰腺癌的基因治疗上具有潜在价值。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-9
序言  9-12
第一部分茎环引物的SYBR-GREE I实时荧光定量PCR检测miR-155在四种胰腺癌细胞株 PANC -1、SW-1990、BxPc3、Patu8988 中的表达情况  12-25
  材料  12-14
  方法  14-18
  结果  18-22
  讨论  22-25
第二部分 miR-155-inhibitor 序列合成与转染胰腺癌 SW-1990 细胞株后基因阻遏效果及预测靶蛋白 TP53INP1 表达的检测  25-41
  材料  25-27
  方法  27-32
  结果  32-38
  讨论  38-41
第三部分 miR-155 表达阻遏后对胰腺癌 SW-1990 细胞增殖凋亡的影响  41-51
  材料  41
  方法  41-43
  结果  43-47
  讨论  47-51
结论  51-52
参考文献  52-59
综述  59-75
  参考文献  68-75
缩略词表  75-76
攻读学位期间公开发表的论文  76-77
致谢  77-78

阻遏miR-155表达对胰腺癌SW-1990细胞株增殖和凋亡影响的实验研究

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