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RNA聚合酶Ⅱ重组hAFP和hTERT双启动子调控针对IGF-Ⅱ基因的siRNA特异性抑制肝癌细胞生长

作　者: 张良鹏
导　师: 汤绍辉
学　校: 暨南大学
专　业: 消化内科学
关键词: 重组 hAFP/hTERT 启动子 RNA干扰人胰岛素样生长因子Ⅱ基因肝细胞癌 RNA 聚合酶Ⅱ
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：观察人甲胎蛋白（hAFP）和人端粒酶逆转录酶（hTERT）双启动子调控的siRNA对Huh-7肝癌细胞生长的影响。方法:将RNA聚合酶Ⅱ 重组hAFP和hTERT双启动子调控针对IGF-Ⅱ基因的siRNA表达载体（本课题组前期构建）转染Huh-7肝癌细胞和L-02正常肝细胞，采用实时荧光定量PCR检测上述细胞IGF-Ⅱ mRNA表达变化；采用MTS法和流式细胞术检测细胞增殖活性、细胞周期及细胞凋亡变化；采用Western blot检测细胞IGF-Ⅱ基因、细胞增殖相关基因（PCNA）、细胞周期调控相关基因（cyclin E2, cyclin D2, cdc2）及细胞凋亡调控相关基因（Bcl-2）的蛋白水平变化。结果：①实时荧光定量PCR显示，Huh-7肝癌细胞IGF-Ⅱ mRNA表达量显著降低，抑制效率达86%；MTS法结果显示，Huh-7肝癌细胞的增殖受到明显抑制；流式细胞术结果显示，Huh-7肝癌细胞G1期细胞比例显著增加，S期细胞比例显著减少，细胞早期、晚期及总凋亡均显著增加；Western blot结果显示，Huh-7肝癌细胞IGF-Ⅱ、PCNA、cyclin E2、cyclin D2、cdc2及Bcl-2的蛋白表达水平均显著降低。②L-02正常肝细胞上述指标无明显变化。结论：RNA聚合酶Ⅱ重组hAFP和hTERT双启动子调控针对IGF-Ⅱ基因的siRNA可特异性抑制肝癌细胞IGF-Ⅱ mRNA表达及生长，这可能与IGF-Ⅱ基因mRNA及蛋白表达水平显著下调后，进而引起细胞增殖相关基因（PCNA）、细胞周期调控相关基因（cyclin E2,cyclin D2, cdc2）及细胞凋亡调控相关基因（Bcl-2）蛋白表达水平显著降低有关，IGF-Ⅱ基因可能成为肝细胞癌基因治疗的一个新靶点。

全文目录

摘要  3-4
ABSTRACT  4-5
目录  5-6
前言  6-8
材料与方法  8-16
  一、材料  8-9
  二、方法  9-16
结果  16-25
  一、 hAFP 和 hTERT 双启动子调控的 siRNA 对 huh-7 肝癌细胞及 L-02 正常肝细胞 IGF-Ⅱ mRNA 表达  16-17
  二、 hAFP 和 hTERT 双启动子调控的 siRNA 对 huh-7 肝癌细胞及 L-02 正常肝细胞增殖的影响  17-19
  三、 hAFP 和 hTERT 双启动子调控的 siRNA 对 huh-7 肝癌细胞和 L-02 正常肝细胞细胞周期的影响  19
  四、 hAFP 和 hTERT 双启动子调控的 siRNA 对 huh-7 肝癌细胞和 L-02 正常肝细胞细胞凋亡的影响  19-22
  五、 hAFP 和 hTERT 双启动子调控的 siRNA 对 huh-7 肝癌细胞和 L-02 正常肝细胞相关蛋白表达影响  22-25
讨论  25-31
  一、 IGF-Ⅱ 基因的表达与肝细胞癌  25
  二、 RNAi 作用机制与构建 siRNA 表达载体启动子的类型及特点  25-27
  三、 hAFP 和 hTERT 双启动子调控的 siRNA 抑制 huh-7 肝癌细胞的生长  27-31
结论  31-32
参考文献  32-37
附录  37-38
缩写词表（中英文对照）  38-39
在校期间发表的论文  39-41
致谢  41

RNA聚合酶Ⅱ重组hAFP和hTERT双启动子调控针对IGF-Ⅱ基因的siRNA特异性抑制肝癌细胞生长

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