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大豆细胞质雄性不育系与保持系基因差异表达的cDNA-AFLP分析及atp6基因RNA编辑研究

作　者: 韩利涛
导　师: 杨守萍
学　校: 南京农业大学
专　业: 遗传学
关键词: 大豆 细胞质雄性不育 差异表达 cDNA-AFLP RNA编辑
分类号: S565.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 8次
引　用: 2次
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内容摘要


细胞质雄性不育在作物杂种优势利用中起重要作用,研究其遗传基础和机制具有重要的理论和实践意义。本文以大豆细胞质雄性不育系NJCMS1A、NJCMS2A及其保持系NJCMS1B、NJCMS2B为材料,开展大豆细胞质雄性不育相关基因差异表达的cDNA-AFLP分析及atp6基因RNA编辑研究,获得如下结果：1.参考多个物种中cDNA-AFLP实验方法,并对具体过程进行改进和优化,建立了大豆cDNA-AFLP差异显示技术体系。从聚丙烯酰胺凝胶电泳结果可以看出,本实验所得到的条带清晰、丰富,结果理想,说明经过改进和优化的cDNA-AFLP差异显示技术完全可以应用于大豆研究。2.采用cDNA-AFLP差异显示技术对大豆细胞质雄性不育系NJCMS1A、NJCMS2A及其保持系NJCMS1B、NJCMS2B的基因差异表达进行研究,分离得到一个差异表达片段2A-2,RT-PCR结果表明2A-2在NJCMS2A花蕾中高表达,对2A-2片段进行同源性比对分析,发现2A-2与MADS-box基因保守区有很高的同源性,进一步对2A-2氨基酸序列进行同源性比对分析、结构功能预测,证实2A-2编码的蛋白是一个MADS-box基因转录因子,可能与大豆细胞质雄性不育有关。3.以大豆细胞质雄性不育系NJCMS1A及其保持系NJCMS1B为材料,对大豆线粒体功能基因atp6基因的RNA编辑进行研究,结果发现大豆atp6-3基因保守区的RNA编辑位点较少,mtDNA序列分析表明atp6-3基因保守区在NJCMS1A与NJCMS1B间存在一个碱基的差异,另外还发现atp6-1、atp6-2和atp6-3的表达在NJCMS1A与NJCMS1B间存在明显差异,至于atp6基因与大豆细胞质雄性不育之间的关系尚需要进一步研究。

全文目录


摘要  6-7ABSTRACT  7-8缩略词表  8-9第一部分  9-28  文献综述  10-28    1 植物雄性不育  10-13      1.1 植物雄性不育概述  10-11      1.2 植物雄性不育类型  11-13    2 大豆雄性不育研究  13-16      2.1 大豆细胞质雄性不育  13-14      2.2 大豆核雄性不育  14-15      2.3 大豆雄性不育的利用  15-16    3 细胞质雄性不育败育机制  16-19      3.1 线粒体嵌合基因与CMS  16      3.2 RNA编辑与CMS  16-19    4 雄性不育相关基因的克隆  19-26      4.1 功能克隆  20      4.2 转座子标签法  20-21      4.3 定位克隆技术  21      4.4 同源序列克隆方法  21-22      4.5 mRNA差异显示技术  22      4.6 cDNA-AFLP技术  22-26    5 本研究的目的和意义  26-28第二部分  28-64  第一章 大豆细胞质雄性不育系与保持系花发育期基因差异表达的cDNA-AFLP分析  29-52    1 材料和方法  29-39      1.1 实验材料  29-30      1.2 实验方法  30-39    2 结果与分析  39-49      2.1 总RNA的提取与检测  39      2.2 总RNA的DNaseI消化  39-40      2.3 cDNA-AFLP多态性分析  40-43      2.4 差异片段的回收与克隆  43-44      2.5 差异片段的测序和比对  44-46      2.6 差异片段的序列分析  46-47      2.7 RT验证  47-48      2.8 2A-2的功能分析  48-49    3 讨论  49-52      3.1 提高RNA质量的措施  49      3.2 cDNA混合池的构建  49-50      3.3 cDNA-AFLP差异显示方法的有效性和改进  50      3.4 MADS-box基因片段2A-2与大豆雄性不育  50-52  第二章 大豆细胞质雄性不育系与保持系atp6基因的RNA编辑研究  52-64    1 材料和方法  52-55      1.1 实验材料  52      1.2 实验方法  52-55    2 结果与分析  55-62      2.1 mtDNA的质量检测  55      2.2 atp6基因扩增  55-56      2.3 片段回收、转化、克隆  56-57      2.4 atp6-3基因RNA编辑  57-62    3 讨论  62-64      3.1 大豆mtDNA的提取  62      3.2 atp6基因RNA编辑与大豆雄性不育  62-63      3.3 ap6基因与大豆雄性不育  63-64全文结论  64-65参考文献  65-72致谢  72

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中图分类: > 农业科学 > 农作物 > 经济作物 > 油料作物 > 大豆
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