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蝎毒多肽提取物对HepG2肝癌血管生成抑制作用的实验研究

作　者: 李晓辉
导　师: 张维东
学　校: 济南大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 蝎毒多肽提取物 肝癌 血管生成
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


目的研究蝎毒多肽提取物对肿瘤微环境中血管生成相关因子VEGF、HPA、survivin、CD34表达的影响，观察对HepG2肝癌生长的抑制作用，进一步探讨其抗血管生成的分子机制，揭示PESV的抗肿瘤作用机理，为肝癌的治疗提供理论依据，从而将PESV与传统的化疗药物相结合。方法1．MTT法检测细胞增殖抑制率，流式细胞术检测细胞周期变化。2．建立HepG2肝癌皮下种植瘤模型，将荷瘤动物随机分为荷瘤对照组、PESV组和阳性对照组，阳性对照组采用顺铂作为阳性对照药物，检测肿瘤体积并计算抑瘤率，观察PESV对肿瘤生长的抑制作用。3．常规HE染色，观察肿瘤组织病理变化。4．免疫组化法检测肿瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)、乙酰肝素酶（HPA）、survivin、CD34的表达。5．Western-blot方法检测瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)、乙酰肝素酶（HPA）、survivin的表达。结果1.PESV对细胞增殖抑制率及细胞周期的影响与阴性对照组相比，PESV＜20μg mL-1时，作用于HepG2肝癌细胞48h后，抑制增殖作用不明显。但当PESV＞40μg mL-1时，抑制增殖作用明显增强，与阴性对照组相比，P<0.05，差异有统计学意义。20～100μg mL-1剂量组之间两两比较差异显著均，P<0.05，总体呈剂量-效应关系。流式细胞术结果显示，PESV能使细胞周期阻滞于G0/G1期，减少S期及G2/M期的细胞比例，与阴性对照组相比，P＜0.05，顺铂组与PESV组相比，P＜0.05，差异显著。2.PESV对HepG2肝癌生长的影响荷瘤对照组、PESV组和阳性对照组小鼠移植肿瘤的体积明显增大。分别与荷瘤对照组相比，PESV组和阳性对照组对肿瘤体积的抑制作用较明显，差异有统计学意义（P＜0.05）。与荷瘤对照组相比，各给药组小鼠的肿瘤重量明显降低，差异显著。PESV组和阳性对照小鼠的瘤重分别为1.22±0.15g和0.80±0.22g。其中，阳性对照组对肿瘤的抑制作用最强，PESV对肿瘤组织也有较强的抑制作用，抑瘤率分别为63.51％和47.17％。3、PESV对肿瘤组织中VEGF、HPA、survivin、CD34表达的影响免疫组织化学染色显示，VEGF、HPA、survivin阳性产物呈棕黄色颗粒，主要定位于肿瘤细胞胞浆，CD34阳性产物表达于肿瘤组织微血管内皮细胞，经半定量图像分析，PESV组和阳性对照组肿瘤组织VEGF、HPA、survivin表达明显低于对照组(P＜0.05)。4、PESV对肿瘤组织中VEGF、HPA、survivin蛋白表达的影响荷瘤对照组、PESV组和阳性对照组均可检测到VEGF、HPA、survivin蛋白的表达，与荷瘤对照组相比，PESV组和阳性对照组VEGF、HPA、survivin蛋白水平均明显减弱，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论1、PESV可抑制HepG2肝癌细胞的增殖和生长。2．PESV对能够干预肝癌的血管生成，并对肿瘤的侵袭转移有一定的作用。3．PESV抗肿瘤作用机制可能与降低肿瘤组织血管生成相关因子VEGF、HPA、survivin的表达及降低微血管密度有关。

全文目录


研究生指导老师及课题指导小组成员介绍  4-6
摘要  6-8
Abstract  8-10
主要符号表  10-11
前言  11-13
材料与方法  13-19
  1.实验材料  13-14
  2.实验方法及步骤  14-19
  3.统计学分析  19
结果  19-22
  1.MTT 法检测细胞增殖抑制率  19
  2.流式细胞术检测细胞周期  19
  3.PESV 对 HepG2 肝癌生长的影响  19-20
  4.肿瘤组织病理学变化  20
  5.PESV 对肿瘤组织中血管生成相关因子 VEGF、HPA、survivin、CD34 表达的影响  20-21
  6.Western-blot 方法检测肿瘤组织中 VEGF、HPA、survivin 蛋白水平表达  21-22
讨论  22-33
附图  33-41
参考文献  41-47
综述  47-52
  参考文献  50-52
攻读学位期间取得的研究成果  52-53
致谢  53

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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