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4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯诱导五种实体肿瘤细胞分化及其对维甲酸受体RARs和RXRs表达的影响

作　者: 吴菲
导　师: 陈飞虎
学　校: 安徽医科大学
专　业: 药理学
关键词: 全反式维甲酸 ATPR 诱导分化 增殖 肿瘤细胞株 RARs RXRs
分类号: R730.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


目的：本研究观察新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯（4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate, ATPR）对食管癌细胞株ECA-109、胃癌细胞株MGC80-3、胰腺癌细胞株PANC-1、宫颈癌细胞株HeLa及神经母细胞瘤SH-SY5Y增殖的影响和诱导分化的活性，并探讨其作用的分子机制。方法：1.新型维甲酸类衍生物ATPR(10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L)作用于肿瘤细胞株ECA-109、MGC80-3、PANC-1、HeLa、SH-SY5Y细胞后，通过MTT法检测细胞的增殖情况；瑞氏吉姆萨染色法在倒置相差显微镜下观察加药处理前后细胞形态学变化；分光光度法检测胃癌细胞分化标志酶ALP、LDH活性，酶联免疫法检测食管癌细胞分化标志酶鳞状上皮癌相关抗原（SCC-Ag）活性、胰腺癌标志物糖链抗原199（CA199）和宫颈癌标志物糖链抗原125（CA125）活性，免疫细胞化学法检测神经母细胞瘤分化标志物神经元特异性烯醇化酶（NSE）活性；流式细胞仪测定细胞周期的变化。2.选择MGC80-3、SH-SY5Y细胞为实验对象，设空白对照组（加入等体积的DMEM）、溶剂对照组（含0.05%无水乙醇）、阳性对照组ATRA (10-5mol/L)及实验组ATPR (10-5mol/L)，采用RT-PCR技术检测ATPR用药72h后引起的细胞中维甲酸受体RARα，RARβ，RARγ，RXRα，RXRβ，RXRγ mRNA表达的变化。3.为进一步观察ATPR对RARs和RXRs影响的时效学变化，采用RT-PCR法检测ATPR(10-5mol/L)分别用药0、1、3、5、7d后MGC80-3、SH-SY5Y细胞中维甲酸受体RARα，RARβ，RARγ，RXRα，RXRβ，RXRγ转录水平的变化情况。结果：1. ATPR(10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L)体外用药可抑制食管癌细胞株ECA-109、胃癌细胞株MGC80-3、胰腺癌细胞株PANC-1、宫颈癌细胞株HeLa及神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的增殖，且随着剂量的增加，抑制效应增强，抑制作用于药物作用48h后出现，72h后达峰值。ATPR浓度为10-4mol/L时，药物对细胞增殖的抑制效率明显高于其他剂量组，且镜下观察发现5种细胞株均出现皱缩、凋亡。瑞氏吉姆萨染色结果显示ATPR(10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L)体外用药可诱导上述实体肿瘤细胞形态趋于成熟分化。与对照组比较，ATPR用药组ECA-109细胞分泌SCC-Ag活性下降（P<0.05）、MGC80-3细胞中ALP、LDH减少（P<0.05）、HeLa细胞CA125浓度下降（P<0.05）、SH-SY5Y细胞NSE水平上升（P<0.05）。而ATPR用药组PANC-1细胞分泌CA199水平有下降趋势，但与空白对照组比较无统计学差异（P>0.05）；流式细胞仪结果显示ATPR(10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L)用药后各肿瘤细胞G0/G1期细胞表达量增加，S期减少，细胞周期进程受影响，细胞阻滞在G0/G1期。2. ATPR(10-5mol/L)、ATRA(10-5mol/L)作用72h后，与空白对照组相比，MGC80-3中RARα、RARβ表达量升高，RARγ，RXRα，RXRβ，RXRγ表达量无明显变化；SH-SY5Y中RARα、RARβ表达量升高，RXRα表达量下降，而RARγ，RXRβ，RXRγ表达量无明显变化。3. ATPR(10-5mol/L)用药0、1、3、5、7d后，MGC80-3中RARα、RARβ、RXRγ表达量升高，RARγ，RXRα，RXRβ表达量无明显变化；SH-SY5Y中RARα、RARβ表达量升高，RXRα表达量下降，RARγ，RXRβ，RXRγ表达量无明显变化。结论：1.4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯ATPR(10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L)可抑制食管癌细胞株ECA-109、胃癌细胞株MGC80-3、宫颈癌细胞株HeLa及神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的增殖并诱导其分化；4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯ATPR(10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L)可抑制胰腺癌细胞株PANC-1增殖，但诱导分化活性有待于进一步研究。2.维甲酸受体RARα、RARβ、RXRγ可能与ATPR对胃癌细胞株MGC80-3的生长抑制和分化作用有密切关系；维甲酸受体RARα、RARβ、RXRα可能与ATPR对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞生长抑制和分化作用有密切关系，但其确切的关系尚需进一步证实。

全文目录


英文缩略词  5-7
摘要  7-10
Abstract  10-13
第一部分 4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对五种实体肿瘤细胞的诱导分化作用  13-40
  1 前言  13-14
  2 实验材料  14-16
  3 实验方法  16-19
  4 结果  19-35
  5 讨论  35-36
  6 小结  36-38
  参考文献  38-40
第二部分 4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对 MGC80-3、SH-SY5Y 细胞维甲酸受体表达的影响  40-65
  1 前言  40-41
  2 实验材料  41-43
  3 实验方法  43-46
  4 结果  46-58
  5 讨论  58-61
  6 小结  61-62
  参考文献  62-65
个人简历  65-66
致谢  66-68
综述：肿瘤诱导分化剂的研究进展  68-82
  参考文献  78-82

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 一般性问题 > 肿瘤病理学、病因学
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