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重组人骨桥蛋白诱导人近端肾小管上皮细胞向间质细胞转分化的研究

作　者: 邓仲磊
导　师: 顾民
学　校: 南京医科大学
专　业: 外科学
关键词: 骨桥蛋白 肾小管上皮细胞向间质细胞转分化 细胞凋亡
分类号: R692
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


目的：观察人重组骨桥蛋白（rhOPN）对人近端肾小管上皮细胞（HK-2）向间质细胞转分化(EMT)的影响，初步探讨OPN在肾小管EMT中的作用及可能机制。方法：以人近端小管上皮细胞HK-2为体外研究对象，依据重组人骨桥蛋白(rhOPN)的浓度不同（作用浓度分别为0、0.04、0.08、0.12、0.16、0.20μg/ml），将HK-2细胞分成六组，给予rhOPN刺激时间48h后，收集细胞。采用共聚焦显微镜观察细胞形态学变化；实时定量PCR、Westernblot方法检测E-钙黏素（E-cadherin）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、纤连蛋白（Fibronectin）的表达；应用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况。结果：1、在形态学上，rhOPN能够刺激HK-2细胞向间质细胞形态转变；2、通过实时定量PCR分析结果发现，肾小管上皮细胞的特异性标记物E-cadherin的mRNA表达量随着刺激浓度的增加而逐渐降低，而间质细胞的特异性标记物α-SMA以及细胞外基质蛋白Fibronectin的mRNA表达量则逐渐升高，实时定量PCR检测E-cadherin mRNA的相对表达量依次为：1947±301、1114±187.4、668.7±180.4、436.7±121.8、242.7±105.2、223.5±73.40；α-SMA mRNA的相对表达量依次为：0.01465±0.003384、0.03428±0.01200、0.06034±0.005653、0.09205±0.01068、0.1136±0.01892、0.1863±0.02175；Fibronectin mRNA的相对表达量依次为：0.0008176±0.0001026、0.001341±0.0002026、0.001708±0.0001278、0.002170±0.0001611、0.003369±0.0003143、0.004961±0.0003636。3、Western blot分析结果表明随着rhOPN刺激浓度的增加HK-2细胞中E-cadherin蛋白的表达量逐渐降低，而α-SMA、Fibronectin蛋白的表达量则逐渐升高，检测E-cadherin蛋白的相对表达量依次为：1.719±0.159、1.370±0.0159、1.238±0.031、0.916±0.056、0.520±0.065、0.456±0.073；α-SMA蛋白的相对表达量依次为：0.623±0.127、0.640±0.031、0.865±0.0453、1.015±0.107、1.290±0.103、1.381±0.040；Fibronectin蛋白的相对表达量依次为：0.475±0.044、0.499±0.062、0.904±0.066、0.981±0.052、1.272±0.093、1.614±0.056，各组之间差异有统计学意义（均p<0.05）。4、流式细胞仪检测结果显示随着rhOPN刺激浓度的增加，HK-2细胞抗凋亡的能力也逐渐增强。结论：OPN不仅能够刺激HK-2细胞向间质细胞表型转化，而且可增强该细胞抗凋亡的能力，并且其作用呈现出明显的剂量依赖性趋势。

全文目录


摘要  5-7
Abstract  7-9
前言  9-12
材料和方法  12-24
结果  24-29
讨论  29-35
结论  35-36
参考文献  36-39
文献综述  39-54
  参考文献  50-54
英汉缩略语名词对照  54-56
攻读学位期间发表文章情况  56-57
致谢  57

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中图分类: > 医药、卫生 > 外科学 > 泌尿科学（泌尿生殖系疾病） > 肾疾病
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