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姜黄素对小鼠卵巢氧化损伤的保护作用

作　者: 王晓宁
导　师: 张昌军
学　校: 湖北中医药大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: 姜黄素活性氧 P66Shc 卵巢
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的建立卵巢氧化应激的小鼠模型并对其进行评估，观察姜黄素干预小鼠卵巢氧化应激后小鼠卵巢组织中氧化标志物含量、组织形态学变化、P66Shc蛋白的表达以及细胞增殖的情况。研究方法用阴道脱落细胞涂片法观察到连续2个动情周期规律的、未交配过的、性成熟的雌性昆明小鼠作为研究对象，于给药前一天各小鼠统一肌肉注射0.1mg/kg苯甲酸雌二醇，统一动情周期，将小鼠随机分成正常对照组,0mg/kg Cur组,100mg/kg Cur组,150mg/kg Cur组,200mg/kg Cur组，每组15只，除正常对照组用蒸馏水腹腔注射外，各组均用8mg/kg亚砷酸钠溶液腹腔注射（隔日一次）造模，同时正常对照组、0mg/kg Cur组给予0.5%羧甲基纤维素钠灌胃，姜黄素各组分别给予不同剂量姜黄素（100mg/kg、150mg/kg、200mg/kg）每天定时给药，连续给药21天。于第22天用颈椎脱臼法处死小鼠，处死前1小时腹腔注射BrdU，采用酶联免疫吸附法（ELISA法）检测卵巢组织匀浆中活性氧（Reactive oxygen species,ROS）、丙二醛（Malondialdehyde,MDA）、超氧化物歧化酶（Superoxidedismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathioneperoxidase,GSH-Px）含量，蛋白印迹（Western blotting）法评估姜黄素对卵巢P66Shc蛋白表达的影响，免疫组化(Immunohistochemical)法观察姜黄素对卵巢组织细胞增殖的影响。结果1.在实验期间，各小鼠饮水、饮食正常，均未出现反应淡漠、异常兴奋、少食少动、皮毛干枯等异常表现。各小鼠体重均呈增长趋势，体重增长百分比依次为正常对照组(16.52±9.62)，100mg/kg Cur组(16.29±4.86)，150mg/kg Cur组(15.10±5.67)，200mg/kg Cur组(13.02±4.19)，0mg/kg Cur组(11.75±5.88)，各组相比没有统计学意义（P>0.05）。各组卵巢指数分别为200mg/kg Cur组(1.0±0.24)，150mg/kg Cur组(0.98±0.2)，100mg/kg Cur组(0.96±0.22)，正常对照组(0.86±0.19)，0mg/kg Cur组(0.85±0.15)，各组相比没有统计学意义（P>0.05）。2.运用ELISA法检测卵巢组织中ROS, MDA, SOD,GSH-Px的含量。与正常对照组相比，0mg/kg Cur组ROS、MDA含量显著增高，而SOD、GSH-Px含量明显降低，且均具有统计学意义(P<0.05)。与0mg/kg Cur组相比，100,150,200mg/kg Cur组ROS、MDA含量显著降低(P<0.05)。100,150,200mg/kg姜黄素干预后，SOD含量较0mg/kg Cur组显著增高(P<0.05)，GSH-Px在姜黄素各剂量组中含量较0mg/kg Cur组稍高，但是没有明显差异（P>0.05）。卵巢组织HE切片结果提示，0mg/kg Cur组卵巢组织结构破坏明显，出现大量闭锁卵泡。姜黄素干预后，卵巢组织可见各级卵泡结构，闭锁卵泡数量明显减少。3.与正常对照组相比，0mg/kg Cur组卵巢组织中P66Shc蛋白表达明显增高（P<0.05）；100,150,200mg/kg姜黄素干预后卵巢组织中P66Shc蛋白表达与0mg/kg Cur组相比明显降低（P<0.05）；Cur组与正常对照组相比无统计学差异（P>0.05）。4.与正常对照组相比，0mg/kg Cur组卵巢组织中颗粒细胞增殖受到抑制；Cur干预后，颗粒细胞增殖明显增加。结论1.用腹腔注射亚砷酸钠法能够建立较好的小鼠卵巢氧化损伤的动物模型。2.姜黄素可以降低卵巢氧化损伤小鼠卵巢局部氧化产物ROS、MDA的生成，并增加抗氧化酶SOD的含量，提高组织的抗氧化能力，保护卵巢结构功能。3.姜黄素能够从分子水平上降低小鼠卵巢组织P66Shc蛋白表达，从而减少ROS的生成，保护卵巢组织。4.姜黄素能逆转As引起的小鼠卵巢颗粒细胞的凋亡，对颗粒细胞的增殖起到促进作用。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-11
主要英文缩写词索引  11-12
前言  12-14
材料和方法  14-24
  1 对象  14-17
    1.1 实验动物及分组  14
    1.2 主要药品及试剂  14-16
    1.3 主要仪器  16-17
  2 实验方法  17-23
    2.1 观察动情周期  17
    2.2 给药方法  17-18
    2.3 标本收集  18
    2.4 观察指标及检查方法  18-23
  3 统计分析  23-24
结果  24-28
  1 小鼠一般情况观察  24
  2 小鼠卵巢肉眼观、卵巢指数及卵巢组织 HE 染色结果  24-25
  3 卵巢组织中氧化标志物测定  25-26
  4 P66Shc 蛋白表达测定  26-27
  5 细胞增殖测定  27-28
讨论  28-37
  1 氧化应激与卵巢  28-30
  2 动物模型的选择  30-31
  3 中药成分姜黄素与氧化损伤  31-34
  4 氧化标志物与卵巢氧化应激  34-37
结论  37-38
思考与展望  38-39
参考文献  39-46
附录综述  46-54
  参考文献  50-54
攻读学位期间发表的学术论文  54-55
附图  55-57
致谢  57

姜黄素对小鼠卵巢氧化损伤的保护作用

内容摘要

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