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转人乳铁蛋白基因的山羊乳对大鼠代谢机能的影响

作　者: 王二先
导　师: 邹思湘
学　校: 南京农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 人乳铁蛋白转基因山羊乳大鼠代谢免疫
分类号: S827
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

本研究用大鼠动物模型,探讨转人乳铁蛋白（human lactoferrin, hLF）基因的山羊乳对动物生长、代谢、部分免疫指标及肠道组织形态的影响,以评价转hLF基因山羊乳的安全性。1重组山羊乳中乳铁蛋白的检测随机选取泌乳期的转hLF基因波尔山羊和普通波尔山羊各六只,分别于产后3d、7d、14d、28d采集乳样。乳样在4℃,3500rpm离·心10min,除去乳脂；用考马斯亮蓝染料结合分析法--Bradford法测定脱脂乳中总蛋白质浓度,SDS-PAGE比较两种乳中蛋白质组分的差异,Western blot分析两种乳中乳铁蛋白（human, LF）的表达。结果表明：LF在泌乳初期高表达,且不同泌乳阶段转hLF基因的山羊乳中LF含量均高于普通山羊乳。2转人乳铁蛋白基因的山羊乳对大鼠代谢机能的影响30只清洁级SD大鼠,雌、雄各半,随机分为3组,转基因乳组每天两次灌喂转hLF基因山羊乳1mL/100g体重(蛋白浓度0.93g·mL^-1),普通乳组同一时间按上述剂量灌喂普通山羊乳(蛋白浓度0.93g·ml^-1),生理盐水组灌喂灭菌生理盐水；自由采食、饮水,连续15天；颈部采血致死,收集血清。利用葡萄糖氧化酶—过氧化物酶终点比色法、赖氏法、脲酶法、除蛋白法、CE-COD-POD比色法等分别测定大鼠血清中血糖（Blood glucose, BG）、谷草转氨酶（Glutamic-oxalacetic transaminase, GOT）及谷丙转氨酶（Glutamic-pyruvic transaminase, GPT）、尿素氮（Serum urea nitrogen, SUN）、血肌酐（Serum creatinine, Scr）、血清总胆固醇（Total cholesterol, TC）含量或活性；放射性免疫分析法检测大鼠血清中胰岛素（Insulin）、胰高血糖素（Glucagon, Glu）、三碘甲状腺素（Triiodothyroxine, T3）、甲状腺素（Thyroxin, T4）水平。结果显示：灌喂转hLF基因的山羊乳显著提高了雌、雄大鼠的日增重,其中与生理盐水组相比P<0.01,与普通乳组比P<0.05,而普通乳组与生理盐水组相比差异不显著；灌喂转基因或普通山羊乳对其他表观及生化指标均无明显影响（P>0.05）。试验结果表明：短期灌喂转hLF基因的山羊乳能够促进大鼠的生长,但对大鼠的代谢机能没有显著影响。3转人乳铁蛋白基因的山羊乳对大鼠肠道及部分免疫指标的影响放射免疫分析法检测大鼠十二指肠粘膜中分泌性免疫球蛋白A（Secreting typeImmunoglobulin A, SIgA）及血清中白介素-2（Interleukin-2, IL-2）水平,H.E染色法观察大鼠十二指肠显微结构,并统计肠粘膜长度；试验结果显示：转hLF基因的山羊乳对雌、雄大鼠肠粘膜中的SIgA及血清中IL-2水平不产生显著影响,但是能够促进大鼠肠粘膜生长。研究结果表明,转hLF基因的山羊乳对大鼠的部分重要免疫指标没有负影响,但能通过促进肠粘膜生长,增加大鼠对营养物质的消化、吸收能力。

全文目录

摘要  7-9
ABSTRACT  9-11
本文部分缩写的中英文对照  11-12
引言  12-14
第一部分文献综述  14-46
  第一章转基因动物  14-22
    1 转基因动物  14
    2 转基因动物的研究方法  14-16
      2.1 反转录病毒感染法  14-15
      2.2 显微注射法  15
      2.3 胚胎干细胞法  15
      2.4 精子载体法  15-16
    3 转基因动物研究发展现状  16-17
    4 转基因动物的应用  17-19
      4.1 在生物制药中的应用  17-18
      4.2 在疾病研究中的应用  18
      4.3 在动物育种中的应用  18-19
      4.4 乳腺生物反应器  19
    5 转基因动物的生物安全及伦理问题  19-22
  第二章转基因动物安全性评价  22-34
    1 转基因动物安全性评价的基本原则  22-25
      1.1 实质等同性原则  22-23
      1.2 FAO/WHO专家联合评议会原则  23-24
      1.3 IFBC/ILSI原则  24
      1.4 UNEP技术准则  24-25
      1.5 国际生命科学会的等同与相似原则  25
      1.6 国际食品法典委员会评估标准  25
    2 转基因动物安全性评价方法  25-34
      2.1 营养学评价方法  26-28
      2.2 毒理学评价方法  28-31
      2.3 过敏性评价方法  31-34
  第三章乳铁蛋白  34-40
    1 LF的结构与特性  34-36
      1.1 来源、分布与含量  34
      1.2 分子结构  34-35
      1.3 热稳定性  35
      1.4 结合特异性  35-36
    2 LF的生理功能  36-38
      2.1 促进铁吸收功能  36-37
      2.2 抗菌作用  37
      2.3 抗病毒作用  37
      2.4 免疫调节作用  37
      2.5 抗肿瘤作用  37-38
      2.6 抗氧化作用  38
      2.7 其他生物学作用  38
    3 重组LF的研究进展  38-40
  参考文献  40-46
第二部分试验研究  46-80
  第一章重组山羊乳中乳铁蛋白的检测  46-58
    摘要  46
    1 材料与方法  46-50
      1.1 主要仪器  46-47
      1.2 主要试剂及配制  47
      1.3 乳样采集  47-48
      1.4 试验方法  48-50
      1.5 数据统计与分析  50
    2 结果  50-53
      2.1 脱脂乳中的总蛋白质浓度  50-51
      2.2 脱脂乳中蛋白质组分比较  51-53
      2.3 转基因山羊与普通山羊乳中乳铁蛋白的分析  53
    3 讨论  53-54
    4 小结  54-55
    ABSTRACT  55-56
    参考文献  56-58
  第二章转入乳铁蛋白基因的山羊乳对大鼠代谢机能的影响  58-70
    摘要  58-59
    1 材料与方法  59-60
      1.1 试验动物  59
      1.2 试验试剂及仪器  59
      1.3 试验方法  59-60
      1.4 测定指标与方法  60
      1.5 数据统计与分析  60
    2 结果与分析  60-65
      2.1 临床及脏器的病理观察  60-61
      2.2 日增重及饲料转化率  61-62
      2.3 器官指数  62-63
      2.4 血液学指标  63
      2.5 血清中SG及GOT、GPT、SUN、Scr、TC等代谢指标的含量变化  63-64
      2.6 血清中Insulin、Glucagon、T_3、T_4等代谢激素水平的变化  64-65
    3 讨论  65-67
    4 小结  67-68
    ABSTRACT  68-69
    参考文献  69-70
  第三章转入乳铁蛋白基因的山羊乳对大鼠肠道及部分免疫指标的影响  70-80
    摘要  70
    1 材料与方法  70-73
      1.1 试验动物  70
      1.2 主要试剂及配制  70-71
      1.3 主要仪器  71
      1.4 测定指标与方法  71-72
      1.5 数据统计与分析  72-73
    2 结果与分析  73-76
      2.1 小肠粘膜中SIgA水平的变化  73-74
      2.2 血清中IL-2水平的变化  74-75
      2.3 大鼠肠道组织形态的变化  75-76
    3 讨论  76-77
    4 小结  77-78
    ABSTRACT  78-79
    参考文献  79-80
全文结论  80-82
致谢  82-84
硕士期间发表和完成的论文  84-86
附录  86-89

转人乳铁蛋白基因的山羊乳对大鼠代谢机能的影响

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