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加压溶剂法提取红三叶草异黄酮及其单体分离研究

作　者: 尹立影
导　师: 张永忠
学　校: 东北农业大学
专　业: 食品科学
关键词: 红三叶草异黄酮加压溶剂提取芒柄花黄素鸡豆黄素分离纯化
分类号: TS201.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

红三叶草(Trifolium Pratense.L)为豆科三叶草属多年生牧草，含有丰富的异黄酮类化合物，其中芒柄花黄素和鸡豆黄素含量相对较高。红三叶草异黄酮具有消炎、抗癌、抗肿瘤、调节人体激素平衡等多种生理作用。芒柄花黄素和鸡豆黄素还是制备大豆异黄酮苷元的重要原料。本试验以红三叶草为原料，研究了红三叶草异黄酮的提取纯化、单体分离和抗氧化的生物活性。研究了加压溶剂法和亚临界水法提取红三叶草总异黄酮，并对两种方法进行比较分析。通过单因素及正交试验确定加压溶剂法提取红三叶草总异黄酮的最佳工艺条件为：提取温度125℃、提取时间5min、提取压力1.6MPa、液固比25ml/g，乙醇浓度70%，红三叶草总异黄酮最终粗得率为49.58mg·g-1。通过单因素及正交试验确定亚临界水法提取红三叶草总异黄酮的最佳工艺条件为：提取温度120℃、提取时间15min、提取压力1.4MPa、液固比50ml/g，红三叶草总异黄酮最终粗得率为33.61mg·g-1。研究结果表明加压溶剂法提取率高于亚临界水法。研究了大孔树脂法纯化红三叶草总异黄酮的方法。通过静态吸附与解析试验研究了5种大孔吸附树脂的吸附效果，结果表明AB-8对红三叶草总异黄酮的综合性吸附效果最好。选取70%浓度乙醇作为洗脱液，用AB-8大孔吸附树脂进行动态试验，得到最佳纯化条件为：选择上样液浓度为0.2173mg/mL，样液体积为3BV，进样流速为1mL/min，洗脱液体积为2BV，洗脱流速为2mL/min，在以上条件下异黄酮回收率为96.61%，大孔树脂纯化前黄酮粗提液纯度为5.03%，纯化后样品纯度为65.58%。应用高速逆流色谱法对经过大孔树脂纯化的红三叶草异黄酮进行再次纯化，分离出芒柄花黄素和鸡豆黄素，确定最佳溶剂体系为：正己烷：氯仿：甲醇：水=1.5:3:3:2；HSCCC分离操作参数：主机温度为30℃，主机转速为900r/min，流动相流速为2mL/min，样品浓度5.26mg/mL。在上述条件下得到的芒柄花黄素和鸡豆黄素的纯度分别为92.87%和83.48%。研究了芒柄花黄素和鸡豆黄素清除超氧自由基、清除羟自由基、清除DPPH能力及其还原能力。研究结果表明，芒柄花黄素和鸡豆黄素的抗氧化能力随浓度的增大逐渐增大；相同浓度下，鸡豆黄素的抗氧化能力高于芒柄花黄素。

全文目录

摘要  8-9
ABSTRACT  9-11
1 前言  11-21
  1.1 立题背景及意义  11-12
  1.2 红三叶草及其红三叶草异黄酮简介  12-15
    1.2.1 红三叶草的概况  12
    1.2.2 红三叶草的作用  12
    1.2.3 红三叶草异黄酮化合物的结构与性质  12-14
    1.2.4 异黄酮的生理作用  14-15
  1.3 红三叶草异黄酮提取方法介绍  15-16
    1.3.1 加压溶剂法  15
    1.3.2 亚临界水提取法  15-16
    1.3.3 微波辅助萃取法  16
    1.3.4 超声波辅助提取法  16
  1.4 异黄酮的纯化分离方法  16-18
    1.4.1 大孔树脂的纯化  16-17
    1.4.2 高效逆流色谱分离纯化异黄酮  17
    1.4.3 高效液相色谱  17-18
  1.5 异黄酮类化合物抗氧化活性  18-19
    1.5.1 异黄酮类化合物清除自由基作用  18-19
  1.6 研究的主要内容  19-21
2 材料与方法  21-34
  2.1 试验材料  21-23
    2.1.1 试验原料及来源  21-22
    2.1.2 试验试剂  22-23
    2.1.3 试验仪器设备  23
  2.2 试验方法  23-34
    2.2.1 试验流程  23-24
    2.2.2 红三叶草异黄酮各组分的测定  24-25
    2.2.3 提取红三叶草总异黄酮的方法研究  25-28
    2.2.4 大孔树脂对红三叶草异黄酮的初步纯化  28-30
    2.2.5 高效逆流色谱法分离红三叶草异黄酮单体  30-32
    2.2.6 抗氧化清除自由基测定  32-34
3 结果讨论与分析  34-57
  3.1 原料分析  34-44
    3.1.1 标准曲线的测定  34-36
    3.1.2 加压溶剂法提取红三叶草总异黄酮的研究  36-40
    3.1.4 亚临界法提取红三叶草总异黄酮的研究  40-44
  3.2 大孔吸附树脂纯化异黄酮  44-49
    3.2.1 五种大孔树脂对异黄酮的吸附率与解析率比较  44-45
    3.2.2 静态吸附与解析曲线  45-46
    3.2.3 吸附和解析条件选择  46-49
  3.3 高速逆流色谱法分离红三叶草异黄酮  49-54
    3.3.1 两相体系的确定  49
    3.3.2 HSCCC 单因素试验结果与分析  49-51
    3.3.3 高速逆流色谱分离红三叶草异黄酮单体  51-52
    3.3.4 高效液相色谱检测各组分及其纯度测定  52-54
  3.4 异黄酮类化合物抗氧化性能的测定  54-57
    3.4.1 清除超氧自由基  54
    3.4.2 清除羟自由基  54-55
    3.4.3 清除 DPPH 能力  55-56
    3.4.4 还原能力  56-57
4 结论  57-58
  4.1 本研究创新点  57
  4.2 本实验结论  57-58
致谢  58-59
参考文献  59-64
攻读硕士期间发表学术论文  64

加压溶剂法提取红三叶草异黄酮及其单体分离研究

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