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斑马鱼肝脏微细结构及胆管系统的研究

作　者: 初晓红
导　师: 陈秋生
学　校: 南京农业大学
专　业: 基础兽医
关键词: 斑马鱼肝脏胆管系统显微结构超微结构免疫组织化学
分类号: Q95-331
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

斑马鱼(Brachydanio rerio)具有个体小、易养殖、繁殖能力强、生殖周期短、遗传背景清晰、体外受精且胚胎发育透明等特点。广泛应用于遗传发育、药物筛选、毒性试验以及分子生物学等领域的研究。斑马鱼已经成为继小鼠、果蝇和线虫之后的又一模式动物。肝脏是鱼体最大的腺体,在物质代谢、解毒、凝血和防御等生命活动过程中起着至关重要的作用。迄今为止,一些学者主要从基因水平探究斑马鱼肝脏的发育情况以及一些人类疾病动物模型,从形态学角度来研究斑马鱼肝脏的报道较少。本研究的目的在于从形态学角度来阐述和解读斑马鱼肝脏的组织构造,为进一步研究斑马鱼肝脏的发育与功能代谢提供形态学依据,并为斑马鱼肝脏三维构建和结构量化奠定基础。试验Ⅰ斑马鱼肝脏的显微和超微结构应用光镜和透射电镜技术对斑马鱼肝脏的组织形态和超微结构进行了观察。结果表明,斑马鱼肝脏没有典型的门管区,静脉和胆管随机地分布在肝实质中,很难观察到动脉。肝板由两层并列的肝细胞排列成双层板状结构,以中央静脉为中心呈散射状分布,肝板(肝细胞索)呈弯曲、分支和吻合状态,其间是血窦。肝细胞核大而圆,核仁分区明显,核孔数目多,且密度大,呈现细胞代谢活跃旺盛的形态。胞质中粗面内质网(RER)既有管状结构也有扁平囊状结构,扁平囊状结构的RER呈区域化的层层排列,可达20多层。线粒体成群分布,并且与RER紧密接触,为RER合成蛋白质提供能量。本实验通过电镜观察发现当细胞质富含线粒体、RER、核糖体时,核孔的数目多,细胞质内出现一定量的溶酶体,糖原在细胞质内有少量的聚集。当细胞质内有大量的糖原分布时,则核孔的数目较少,且细胞器也较少。表明,当细胞的合成活性旺盛时,细胞内的大部分糖原被消耗利用,以保证肝细胞内核酸和蛋白质正常代谢,而线粒体也在细胞内蛋白质合成的过程中提供能量。本文也对内皮细胞、贮脂细胞、红细胞和淋巴细胞进行了描述。并对斑马鱼肝脏的结构与其他硬骨鱼类进行了比较。试验Ⅱ斑马鱼肝脏胆管系统的研究应用光镜、透射电镜技术以及免疫组织化学方法,系统观察斑马鱼肝脏胆管系统组织结构和超微结构。结果表明,斑马鱼肝脏胆管系统在肝实质内呈树枝状分布。胆管系统由细胞内和细胞间胆道、前胆小管,胆小管和胆管构成。细胞内胆道起源于细胞核附近,并且存在向细胞表面迁移的现象。前胆小管由前胆小管上皮细胞(BP细胞)和肝细胞共同构成管道的管壁。BP细胞位于肝细胞之间,胞质少,细胞核呈狭长形,通过透射电镜观察发现,BP细胞与肝细胞通过紧密连接进行细胞间的通讯活动。胆小管管壁通常由2-4个上皮细胞构成,胆小管上皮细胞与肝细胞之间直接接触,并没有基底膜使之相隔。本实验通过透射电镜还观察到了由一个上皮细胞质膜突起再内折形成的胆小管,并通过一个纵向的连接复合体密封管道。胆管的管壁上皮细胞由立方上皮细胞或柱状上皮细胞构成,胆管外有结缔组织环绕。此外,淋巴细胞也参与了胆管管壁上皮细胞的构成,表明胆管存在粘膜免疫的应答。前胆小管和胆小管是连接细胞内胆道和胆管的部分,因此,本实验认为前胆小管和胆小管相当于哺乳动物的赫林管。Mg2+-ATP酶反应显示,胆管系统被染成棕黑色,交织成网。通过免疫组织化学的方法发现胆管系统的上皮细胞的胞体以及起源于这些细胞的胆汁管道呈阳性。上述结果显示,斑马鱼胆管系统不仅与哺乳类和乌类有差异,而且与其他硬骨鱼类也不完全相同。

全文目录

摘要  7-9
ABSTRACT  9-11
前言  11-12
第一部分文献综述  12-23
  第一章斑马鱼肝脏在科研上的应用  12-16
    第一节人类疾病动物模型  12-14
      1. 胆管系统疾病模型  12
      2. 造血系统疾病模型  12-13
      3. 肝癌模型  13-14
    第二节环境监测  14-16
      1. 环境中雌激素的检测  14
      2. 利用肝脏中卵黄蛋白原检测雌激素  14-15
      3. 水体中重金属的检测  15-16
  第二章硬骨鱼类肝脏的研究现状  16-19
    第一节硬骨鱼类肝脏的形态构造  16-17
      1. 显微结构  16
      2. 超微结构  16-17
        2.1 肝细胞的类型  16-17
        2.2 肝细胞器在卵黄蛋白合成过程中的变化  17
    第二节肝脏胆管系统  17-18
    第三节肝脏非实质性细胞的结构与功能  18-19
      1. 血窦内皮细胞  18
      2. 星状细胞  18-19
      3. 枯否氏细胞  19
  参考文献  19-23
第二部分试验研究  23-58
  第三章斑马鱼肝脏的显微和超微结构  23-38
    摘要  23
    1. 材料与方法  23-24
    2. 结果  24-32
      2.1 肝脏的组织结构  24
      2.2 肝脏的超微结构  24-32
    3. 讨论  32-34
      3.1 斑马鱼肝脏的组织结构特点  32-33
      3.2 斑马鱼肝脏的超微结构  33-34
    参考文献  34-37
    ABSTRACT  37-38
  第四章斑马鱼肝脏胆管系统的研究  38-58
    摘要  38-39
    1. 材料与方法  39-40
    2. 结果  40-53
      2.1 肝脏实质的分布  40
      2.2 胆管系统  40-42
      2.3 Mg~(2+)-ATP酶反应显示胆管系统  42
      2.4 免疫组织化学显示胆管系统  42-53
    3. 讨论  53-55
    参考文献  55-57
    ABSTRACT  57-58
全文总结  58-59
附录Ⅰ 常规石蜡切片的制作过程  59-60
附录Ⅱ 冰冻切片的制作过程  60-61
附录Ⅲ Mg~(2+)激活的三磷酸腺苷酶的显示——硝酸铅法(质膜型ATPase)  61-62
论文发表情况  62-63
致谢  63

斑马鱼肝脏微细结构及胆管系统的研究

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