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ABC转运蛋白乳腺癌耐药蛋白（BCRP）在肉鸡组织中的定位、表达及影响因素研究

作　者: 苏利娅
导　师: 王丽平
学　校: 南京农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: BCRP real time RT-PCR Western blot 年龄大肠杆菌感染球虫感染恩诺沙星
分类号: S852.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

本文主要研究了ABC转运蛋白在肉鸡组织中的表达。试验采用免疫组化、real time RT-PCR以及Western blot的方法对肉鸡的肝脏、十二指肠、空肠、回肠中BCRP的蛋白的表达进行了检测,并采取real time RT-PCR以及Western blot的定量方法探索了日龄和大肠杆菌、球虫感染及口服恩诺沙星对肉鸡不同组织中BCRP表达的影响。将肉鸡肝脏、十二指肠、回肠、空肠进行石蜡包埋后,采用免疫组织化学的方法,利用抗BCRP的抗体对以上组织中的BCRP蛋白进行组织定位。结果表明,肝脏中BCRP主要分布于肝细胞的胞浆及胞膜。在十二指肠、空肠以及回肠中,BCRP分布于肠上皮细胞以及胞核上方的胞质中。采用real time RT-PCR和Western blot方法以β-actin为内参对2周龄肉鸡肝脏、十二指肠、空肠以及回肠BCRP的mRNA和蛋白进行了检测,结果表明,mRNA的表达量在肝脏中最高,其次是空肠和回肠,十二指肠中最低,其中肝脏的BCRP mRNA的表达量极显著高于十二指肠和回肠(P=0.000,P=0.004),显著高于空肠(P=0.024)。回肠BCRP的mRNA表达量显著高于十二指肠(P=0.043)。空肠BCRP的mRNA表达量极显著高于十二指肠(p=0.006)。而Western blot结果经统计分析后表明,BCRP蛋白的表达量在不同组织中差异不显著(p>0.05),但是在肝脏和空肠中BCRP蛋白的表达较回肠和十二指肠的蛋白表达量略高。该结果提示肉鸡肝脏和肠道在mRNA和蛋白水平均有BCRP的表达,且蛋白水平和mRNA水平表达一致,具有显著的相关性(r=0.603,P=0.05)。采用real time RT-PCR技术和Western blot方法对第0(1日龄)、1、2、4、6和8周龄肉鸡肝脏、十二指肠、空肠和回肠中BCRP的表达,探讨了健康肉鸡组织中BCRP的表达随着日龄变化的规律。结果表明,BCRP mRNA的表达在肝脏中从0周龄(1目龄)至第2周龄逐渐升高,2周龄时mRNA表达最高,之后稍有下降,其中第2和6周龄时BCRP的mRNA表达量极显著高于0周龄(p=0.001,P=0.01),第4周龄时BCRP mRNA的表达量显著高于0周龄(p=0.026)。在十二指肠中从0周龄起BCRP mRNA表达量便出现下降趋势,其中第2、4、6和8周龄时的表达量极显著低于0周龄(P=0.000,P=0.002,p=0.000,P=0.000)。在空肠中,1、4和8周龄时BCRP mRNA的表达量极显著高于0周龄(P=0.000,仁0.01,P=0.000),2周龄时mRNA表达量显著高于0周龄(p兰0.029)。在回肠中BCRP的mRNA表达量在1周龄时出现最高值,极显著高于0周龄(P=0.004),之后出现降低趋势。Western blot的结果显示,随着年龄的变化,BCRP蛋白的表达量虽有一定波动,但经统计学处理均无显著性变化(P>0.05)。将mRNA和蛋白表达进行相关性分析后,表明在各组织中BCRP的mRNA和蛋白表达并无显著相关性(r=-0.10,P>0.05)。该结果提示肉鸡在早期生长阶段BCRP mRNA表达量较高,随日龄增加会逐渐下降,但蛋白水平随日龄增加无显著变化。采用real time RT-PCR和Western blot的方法,对大肠杆菌感染肉鸡、球虫感染肉鸡以及口服恩诺沙星肉鸡的肝脏、十二指肠、空肠和回肠中BCRP的表达进行相对定量。结果表明肉鸡感染大肠杆菌后,回肠BCRP mRNA表达极显著上调(P=0.009),而肝脏、十二指肠及空肠的BCRP mRNA表达无显著变化。Western blot结果表明,肉鸡经大肠杆菌感染后,十二指肠中BCRP蛋白表达量显著上调(p=0.043),但在其他组织无显著变化。经大肠杆菌感染后肉鸡各组织BCRPmRNA的表达和蛋白的表达进行相关性分析,结果表明,mRNA和蛋白的表达无显著相关性(r=0.194,p>0.05)。健康肉鸡口服恩诺沙星后,十二指肠的BCRP的mRNA表达显著上调(P=0.009),其他则无显著性变化。健康肉鸡口服恩诺沙星后,各组织中BCRP蛋白的表达量除在空肠有上升趋势外,其他组织中BCRP的表达基本没有变化。将口服恩诺沙星后肉鸡各组织BCRP mRNA的表达和蛋白的表达进行相关性分析,结果表明,mRNA和蛋白的表达无显著相关性(r==0.177,P＞0.05)。肉鸡感染球虫后,BCRP mRNA表达量在肝脏(P=0.021)、回肠(p=0.021)和空肠俨0.021)均出现显著性下调,而在十二指肠中有轻微上调,但变化不显著。BCRP蛋白的表达量在球虫感染后出现了一定变化,球虫感染使肝脏、回肠、空肠中BCRP的蛋白表达有下降趋势,与mRNA表达变化的趋势一致,呈现极显著的相关性(r=0.85,p=0.002)。该结果提示大肠杆菌感染、球虫感染和口服恩诺沙星均可在mRNA水平影响组织中BCRP的表达,但对蛋白表达无显著影响。

全文目录

摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
本文部分縮写的中英文对照  10-11
引言  11-13
第一章文献综述  13-35
  1 ABC(ATP-binding cassette)转运蛋白家族简介  13-14
  2 BCRP的结构  14
  3 BCRP在组织中的分布及细胞定位  14-15
  4 BCRP的底物  15-16
  5 BCRP对药物体内过程的影响  16-18
    5.1 药物吸收方面  16
    5.2 药物分布和代谢方面  16-18
    5.3 与药物排泄的关系  18
  6 影响BCRP表达和功能的因素  18-22
    6.1 疾病对BCRP表达和功能的影响  19
    6.2 年龄对BCRP表达和功能的影响  19-20
    6.3 性别和激素对BCRP表达和功能的影响  20
    6.4 饮食中某些物质对BCRP表达和功能的影响  20
    6.5 药物对BCRP表达和功能的影响  20-21
    6.6 BCRP的基因多态性对BCRP蛋白表达及功能的影响  21-22
  7 与兽医相关的研究  22-24
    7.1 BCRP在常见动物的定位及表达  22-23
    7.2 BCRP在乳腺的功能与药物残留  23-24
    7.3 BCRP对兽药的口服生物利用度及联合用药的影响  24
  8 展望  24-26
  参考文献  26-35
第二章 BCRP蛋白在肉鸡组织中的定位和表达  35-51
  摘要  35
  1 材料与方法  35-41
    1.1 材料  35-37
    1.2 方法  37-41
  2 结果  41-46
    2.1 免疫组织化学方法对BCRP蛋白的定位  41-44
    2.2 RNA抽提结果  44
    2.3 real time PCR动力扩增曲线、产物熔解曲线  44-45
    2.4 肉鸡各组织BCRP mRNA和蛋白的检测  45-46
  3 讨论  46-47
  4 小结  47-48
  参考文献  48-50
  Abstract  50-51
第三章不同日龄肉鸡组织中BCRP表达规律的研究  51-63
  摘要  51-52
  1 材料与方法  52
    1.1 实验材料  52
    1.2 方法  52
  2 结果  52-57
    2.1 不同日龄肉鸡组织中BCRF mRNA的表达水平变化规律  52-54
    2.2 日龄对肉鸡组织中BCRP蛋白表达的影响  54-57
  3 讨论  57-58
  4 小结  58-59
  参考文献  59-61
  Abstract  61-63
第四章疾病感染及恩诺沙星对肉鸡组织中BCRP表达的影响  63-77
  摘要  63-64
  1 材料与方法  64-65
    1.1 实验动物及处理  64
    1.2 方法  64-65
  2 结果  65-70
    2.1 肉鸡大肠杆菌O_(131)感染模型建立  65-66
    2.2 肉鸡球虫感染模型的建立  66
    2.3 大肠杆菌感染及恩诺沙星对BCRP表达的影响  66-69
    2.4 球虫感染对肉鸡组织中BCRP表达的影响  69-70
  3 讨论  70-72
  4 小结  72-73
  参考文献  73-75
  Abstract  75-77
全文结论  77-79
致谢  79-81
攻读硕士学位期间发表的论文  81

ABC转运蛋白乳腺癌耐药蛋白（BCRP）在肉鸡组织中的定位、表达及影响因素研究

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