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C-myc癌基因表达调节的一种新机制

作　者: 孙崙泉
导　师: 苏成芝；Hiroto Naora
学　校: 第四军医大学
专　业: 生物化学
关键词:
分类号: R730.2
类　型: 博士论文
年　份: 1988年
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内容摘要


细胞癌因c-myc是一种与禽类逆转录病毒M-29v-myc同源的原癌基因。已有证据表明，其在B细胞瘤发生和发展中起着重要的作用。在正常细胞中，c-myc一般保持着低水平的表达，而当细胞发生癌变时，c-myc的表达则增高。然而，在正常细胞中，细胞是如何保证c-myc不发生过度表达的，这一问题仍未得到解答。根据基因的领域效应假说，我们提出了c-myc在正常细胞中的表达受到其旁侧基因强表达的抑制。本文的目的在于，验证旁侧基因的存在，分析在转录水平上c-myc与其旁侧基因相互干扰的可能机制，以期为深入研究癌基因的激活机制，提供新的资料。 利用来源于正常小鼠mRNA的cDNA探针，以Southern杂交的方法，在c-myc 5’上游区域发现了一段活跃转录序列(文中称为“旁侧基”)，将此序列(3.8kb)克隆于Bluescribe质粒，构建了PKB3.8质粒，以供进一步分析。深入鉴定表明，能与cDNA探针杂交的序列存在于距离c-myc5′端约2.4kb的SmaI-SmaI 1.1kb片段中。 以双股DNA质粒测定序列法，对1.1kb部分序列测定以及对其进行计算机分析比较结果表明，5′旁侧基因可

全文目录


英文缩写字表  7-13
中文摘要  13-15
英文摘要  15-20
Ⅰ.文献综述  20-44
  1.c-myc癌基因的研究进展  21-34
    1.1.癌基因的分类及基本特征  21-23
    1.2.c-myc基因的激活  23-27
    1.3.c-myc基因表达的调控研究  27-28
    1.4.c-myc基因产物及其细胞效应  28-29
    1.5.c-myc癌基因的放大  29-34
  2.基因的领域效应——一种新的基因表达调节机制  34-44
    2.1.基因在染色体上的排列  34-38
    2.2.基因的领域效应  38-41
    2.3.基因领域效应与癌基因的激活  41-44
Ⅱ.本研究的理论根据及主要目的  44-47
Ⅲ.论文正文  47-137
  1.材料与方法  48-73
    1.1.实验材料  48-54
      1.1.1.实验动物  48
      1.1.2.主要化学试剂与材料  48-49
      1.1.3.限制性内切酶  49
      1.1.4.其他酶类  49-50
      1.1.5.主要仪器  50-51
      1.1.6.菌种与质粒  51-54
    1.2.实验方法  54-73
      1.2.1.核酸的纯化方法  54
      1.2.2.DNA的分离提取  54-59
      1.2.3.RNA的分离与纯化  59-61
      1.2.4.Southern转移  61-62
      1.2.5.Northern转移  62-64
      1.2.6.滤膜杂交条件  64-66
      1.2.7.放射性探针的制备  66-69
      1.2.8.分子克隆方法  69-71
      1.2.9.DNA序列测定  71-73
  2.c-myc及其旁侧“基因”在正常细胞中的表达  73-85
    2.1.引言  73
    2.2.主要材料与方法  73-75
      2.2.1.重组克隆  73-74
      2.2.2.cDNA探针的制备  74-75
      2.2.3.放射性标记DNA分子量标准物的制备  75
    2.3.结果  75-84
      2.3.1.λc-myc限制性图谱的确定  75-80
      2.3.2.cDNA探针与λc-myc的杂交  80-82
      2.3.3.v-myc探针与λc-myc的杂交  82
      2.3.4.来源于不同组织mRNA的cDNA探针杂交  82-84
    2.4.讨论  84-85
  3.c-myc旁侧基因的鉴定分析  85-97
    3.1.引言  85
    3.2.主要方法  85-88
      3.2.1.DNA片段的分离纯化  85-87
      3.2.2.DNA序列的计算机分析  87-88
    3.3.结果  88-94
      3.3.1.pkB3.8质粒的构建  88
      3.3.2.3.8kb片段的鉴定  88-93
      3.3.3.旁侧基因的部分DNA序列测定  93-94
      3.3.4.DNA序列的计算机分析结果  94
    3.4.讨论  94-97
  4.c-myc旁侧基因转录产物的分析  97-113
    4.1.引言  97-98
    4.2.主要方法  98-101
      4.2.1.Riboprobe(RNA探针)的制备方法  98-99
      4.2.2.RNase Mapping方法  99-101
    4.3.实验结果  101-110
      4.3.1.Northern杂交检测旁侧基因转录产物  101-102
      4.3.2.不同组织中旁侧基因的表达比较  102-104
      4.3.3.旁侧基因与c-myc基因的表达比较  104-107
      4.3.4.RNase Mapping确定旁侧基因的末端  107-110
    4.4.讨论  110-113
  5.旁侧基因在不同种属中的存在情况  113-122
    5.1.引言  114
    5.2.主要材料与实验方法  114-116
      5.2.1.基因组DNA  114-115
      5.2.2.DNA的硷性转移  115-116
      5.2.3.改良的Southern杂交法  116
    5.3.实验结果  116-118
      5.3.1.小鼠基因组中旁侧基因的检出  116-118
      5.3.2.不同种属基因组中旁侧基因的检出  118
    5.4.讨论  118-122
  6.讨论  122-137
    6.1.基因的领域效应与c-myc基因的表达  122-126
    6.2.旁侧基因的意义  126-135
    6.3.旁侧基因的进化保守性  135-137
Ⅳ.结论  137-140
Ⅴ.致谢  140-142
Ⅵ.参考文献  142-155

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 一般性问题 > 肿瘤病理学、病因学
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