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p55PIK对细胞周期的调控和DNA合成的影响及机制的研究

作　者: 曹小年
导　师: 胡俊波
学　校: 华中科技大学
专　业: 普外科
关键词: 磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K) p55PIK DNA合成 细胞周期
分类号: R730.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 9次
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内容摘要


目的: p55PIK的N端24个氨基酸(以下简称N24)能够抑制细胞S期进展,使细胞阻滞在G0/G1期,其可能机制有Rb依赖的途径和Rb非依赖途径的可能性。本研究通过p55PIK腺病毒,高表达p55PIK,检测其对细胞周期及DNA合成的影响,并寻找其Rb非依赖性机制。方法:利用本实验室前期构建的腺病毒Ad-p55PIK-GFP,在FTC236细胞(天然Rb缺失的甲状腺癌细胞)内高表达p55PIK,western blot方法证明p55PIK高表达后,通过Brdu和H3参入的方法检测p55PIK对FTC236细胞DNA合成的影响,PI方法检测其对细胞周期的影响。通过定量免疫共沉淀方法(quantity co-immunoprecipitation QIP)证明p55PIK对细胞增殖核抗原(proliferating cell nuclear antigen PCNA)与DNA聚合酶δ(DNA polymeraseδ)之间结合的影响,免疫共沉淀(co-immunoprecipitation IP)证明p55PIK与细胞核增殖抗原之间的结合关系,阐述p55PIK促进DNA合成的Rb非依赖性机制。结果:通过高表达p55PIK,Brdu和H3检测均发现p55PIK能促进FTC236细胞DNA的合成,PI方法检测发现p55PIK能促进其S期的增多。通过IP证实p55PIK能够与PCNA结合,高表达p55PIK能够促进PCNA和DNA聚合酶δ的结合,而N24能竞争性的抑制p55PIK的这些功能。结论:p55PIK能够直接与PCNA结合,促进PCNA与DNA聚合酶δ的结合,从而促进FTC236细胞DNA合成,调控细胞周期。

全文目录


中文摘要  5-6
英文摘要  6-8
前言  8-9
材料和方法  9-16
实验结果  16-22
讨论  22-25
参考文献  25-27
文献综述  27-45
  参考文献  36-45
致谢  45

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 一般性问题 > 肿瘤治疗学
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