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HSV-1特异转移因子的抗原依赖活性及其化学本质的研究

作　者: 黄莉莉
导　师: 苏成芝
学　校: 第四军医大学
专　业: 生物化学
关键词:
分类号: R392
类　型: 博士论文
年　份: 1986年
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内容摘要


转移因子（TF）是裂解白细胞的可透折物质，作为细胞免疫的调节因子得到广泛的研究并应用于临床。不少实验资料表明，TF能够增强非特异性细胞免疫反应。由于TF成分复杂，其化学本质迄今尚未确证，致使关于TF的抗原特异性实验结果不尽。一致，阻碍了TF的深入研究。因此分离和鉴定TF中能转移特异性细胞免疫的活性成分是继续深、入探讨TF的重要环节。 本研究从工型单纯疱疹病毒（HSV-1）为抗原制备特异性TF（TF HSV-1），用51Cr-白细胞粘附抑制实验和皮肤迟发型超敏反应鉴定TFHSγ-1的抗原依赖免疫活性，并观察其抗感染的保护效应；亲和色谱法分离纯化TFHSV-1特异活性成分，并进而阐明其化学本质。 199培养介质稀释的活HSV-1腹腔注射免疫小鼠（HSV-1东BHK21细胞中传代）。对照鼠注射199介质。以皮试反应制定免疫状态，免疫四周后取HSV-1免疫鼠和对照鼠的脾细胞裂解后径最高分子量截流范圈12，000-14，000 dalton的透折袋（美国 Spectran Medieal Industries公司）透析制成TF，分别称为TF HSV-1和TFn。 我们用51Cr白细胞粘附抑制实验体外鉴定TF HSV-1抗原

全文目录


一、英文缩写字表  10-14
二、摘要(附英文摘要)  14-25
三、文献综述  25-54
  (一).TF抗原特异性的研究  25-34
    1.TF研究概况  25-27
    2.TF的抗原特异性  27-34
  (二).TF活性成分的分离纯化  34-44
  (三).单纯疱疹病毒感染与治疗  44-54
    1.单纯疱疹病毒感染  44-46
    2.HSV感染与免疫  46-48
    3.HSV感染的治疗  48-54
四.本研究的目的  54-55
五.统计学处理  55-56
六.论文正文  56-210
  (一).HSV-1特异转移因子的抗原依赖活性  56-138
    1.前言  56-59
    2.材料  59-62
      2.1.动物  59
      2.2 仪器  59
      2.3.试剂  59-60
      2.4.抗原  60-62
    3.方法  62-66
      3.1.动物免疫  62
      3.2.TF HSV-1的制备  62-63
      3.3.TFn的制备  63
      3.4.~(51)Cr—白细胞粘附抑制实验  63-64
      3.5.皮肤实验  64
      3.6.HSV—1腹腔接种  64
      3.7.HSV—1脑腔接种  64-65
      3.8.LD_(50)测定  65
      3.9.脑常规组织学制片染色  65
      3.10.PAP免疫酶染色  65-66
    4.结果  66-127
      4.1.TF理化性质分析  67-70
      4.2.~(51)Cr—白细胞粘附抑制实验检测TFHSV—1抗原特异活性  70-78
        4.2.1.~(51)Cr—标记白细胞最佳条件的选择  70-72
        4.2.2.HSV-1抗原浓度与TF剂量选择  72-75
        4.2.3.TF HSV—1依赖特异抗原的粘附抑制活性测定  75-78
      4.3.TF HSV—1介导抗原特异皮肤迟发型超敏反应  78-95
        4.3.1.TF HSV—1剂量与皮肤迟发型超敏反应的关系  80-82
        4.3.2.TF HSV—1介导迟发型超敏反应的抗原依赖性  82-95
          4.3.2.1.TF HSV—1介导抗原特异皮肤迟发型超敏反应的定量测定  83-84
          4.3.2.2.皮试部位原组织学检查  84-95
      4.4.TF HSV—1对HSV—1感染小鼠的保护作用  95-127
        4.4.1.HSV-1脑炎小鼠模型的建立  96-118
          4.4.1.1 HSV-1腹腔攻击小鼠的临床表现  97-98
          4.4.1.2.HSV-1感染小鼠的脑形态学检查  98-100
          4.4.1.3.HSV-1感染小鼠脑PAP免疫酶染色  100-118
        4.4.2.TF HSV—1对HSV—1感染小鼠的保护作用  118-127
          4.4.2.1.TF HSV—1对HSV—1感染小鼠存活时间及存活率的影响  119-120
          4.4.2.2.TF处理小鼠脑形态学检查  120
          4.4.2.3.正常小鼠脑形态学检查  120-127
    5.讨论  127-137
      5.1.特异TF的制备  127-130
        5.1.1.抗原选择  127-128
        5.1.2.供体致敏  128-130
        5.1.3.分子量范围  130
      5.2.~(51)Cr-白细胞粘附抑制实验是检测TF特异活性的灵敏方法  130-133
      5.3.TF_(HSV-1)对HSV-1感染小鼠的保护作用  133-137
    6.小结  137-138
  (二).HSV-1特异转移因子活性成分的分离  138-165
    1.前言  138-140
    2.材料  140-142
      2.1.仪器  140
      2.2.试剂  140-142
    3.方法  142-144
      3.1.HSV-1抗原免疫吸附剂的制备  142
      3.2.亲和色谱法纯化TF_(HSV-1)特异活性成分  142-143
      3.3.对照吸附剂的制备  143-144
    4.结果  144-156
      4.1.亲和色谱法分离TF_(HSV-1)特异成分  144-149
        4.1.1.BSA和戊二醛用量选择  144
        4.1.2.偶联率测定  144-145
        4.1.3.选译TF_(HSV-1)与免疫吸附剂的最佳反应时间  145-146
        4.1.4.活性成分洗脱条件的选择  146-148
        4.1.5.免疫吸附剂的特异性  148-149
      4.2.TF_(HSV-1)特异成分体外介导对相关抗原的白细胞粘附抑制  149-152
        4.2.1.不同浓度TF_(HSV-1)特异成分对相关抗原的粘附抑制效应  149-150
        4.2.2.TF_(HSV-1)特异成分介导抗原依赖的白细胞粘附抑制  150-151
        4.2.3.TF_(HSV-1)纯化前后LAI活性的比较  151-152
      4.3.TF_(HSV-1)特异成分在HSV-1感染过程中的保护效应  152-156
        4.3.1.TF_(HSV-1)保护剂量曲线  152-153
        4.3.2.TF_(HSV-1)特异成分对HSV-1感染小鼠的保护效应  153-156
     5.讨论  156-164
      5.1.TF特异活性成分的分离  156-160
      5.2.TF_(HSV-1)纯化前后活性的比较  160-164
    6.小结  164-165
  (三).HSV-1特异转移因子活性成分的化学本质  165-210
    1.前言  165-167
    2.材料  167-171
      2.1.仪器  167-168
      2.2.试剂  168-171
    3.方法  171-183
      3.1.高效液相色谱法  171-172
        3.1.1.试剂配制  171
        3.1.2.操作  171-172
          3.1.2.1.离子交换色谱  171
          3.1.2.2.反相色谱  171-172
      3.2.薄层层析  172-174
        3.2.1.试剂配制  172
        3.2.2.制板  172-173
        3.2.3.薄层析  173-174
      3.3.等电聚焦  174-177
        3.3.1.试剂配制  174-175
        3.3.2.制胶  175
        3.3.3.电泳  175-177
        3.3.4.电泳后凝胶的处理  177
      3.4.凝胶层析法测定分子量  177-178
      3.5.考马斯亮兰法测定多肽量  178-180
        3.5.1.试剂配制  178-179
        3.5.2.绘制标准曲线及样品测定  179-180
      3.6.二苯胺法测定DNA量  180-181
        3.6.1.试剂配制  180
        3.6.2.操作  180-181
      3.7.Orcinol法测定RNA量  181-182
        3.7.1.试剂配制  181-182
        3.7.2.操作  182
      3.8.氨基酸分析  182-183
    4.结果  183-204
      4.1.TF高效液相色谱分析  183-193
        4.1.1.离子交换色谱  183-188
        4.1.2.反相色谱  188-193
      4.2.TF_(HSV-1)特异成分薄层层析分析  193-195
      4.3.TF等电聚焦分析  195-198
      4.4.TF_(HSV-1)特异成分多肽、DNA和RNA含量测定  198
      4.5.TF_(HSV-1)特异成分分子量测定  198-202
      4.6.TF_(HSV-1)特异成分氨基酸组成及含量  202-204
    5.讨论  204-209
      5.1.TF特异活性成分的化学本质  204-207
      5.2.TF与T细胞受体  207-209
    6.小结  209-210
七.结论  210-213
八.致谢  213-214
九.参考文献  214-266

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学免疫学
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